專(zhuān)利名稱(chēng)：驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物有效部位，具體來(lái)說(shuō)，是驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊的有效部位，本發(fā)明也涉及該有效部位的制備方法和制藥用途。
背景技術(shù)：
白癜風(fēng)是常見(jiàn)的一種局限性色素減退性皮膚病，發(fā)病率為0.5-2.0％，由于致病原因和發(fā)病機(jī)理目前尚未明確，國(guó)際上至今仍處于易診難治的狀況。該病被世界醫(yī)學(xué)界列為疑難病癥之一。目前白癜風(fēng)的藥物治療方法有補(bǔ)骨脂素聯(lián)合UVA治療、皮質(zhì)激素療法、凱林聯(lián)合UVA療法、金屬元素配合PUVA療法、苯丙氨酸配合UVA療法以及中藥療法。
驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊為菊科植物驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊Vernonia anthelmintica Willd的瘦果。于夏秋果實(shí)成熟時(shí)割??；或分別割取成熟果枝，打下果實(shí)，存于陰涼干燥處。原產(chǎn)于印度、巴基斯坦，中國(guó)新疆已有長(zhǎng)約四百年的栽培歷史。主要分布于新疆阿克蘇地區(qū)。是新疆維吾爾民間治療白癜風(fēng)的藥物，在70年代新疆藥學(xué)研究人員將其制成醫(yī)院制劑，應(yīng)用于臨床治療白癜風(fēng)，治愈率為7-20％，有效率大于90％，并且未見(jiàn)毒副作用。但是至今對(duì)驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊中的有效成分尚不清楚。為此，本發(fā)明人進(jìn)行了進(jìn)一步的篩選分離工作，發(fā)現(xiàn)了驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊治療色素代謝疾病如白癜風(fēng)的有效部位，從而完成了本發(fā)明。
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是提供一種驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位。
本發(fā)明的另外一個(gè)目的是提供該驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位的制備方法。
本發(fā)明的又外一個(gè)目的是提供該驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位在制備色素代謝疾病如白癜風(fēng)的藥物的用途。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所述的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位可以由下列方法但不是唯一方法獲得將驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊成熟果實(shí)用中等極性到強(qiáng)極性溶劑加熱回流，得到提取液，減壓回收，濃縮，得到濃縮液，調(diào)pH為2-10，離心分離，得到上清液，將上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂依次用水和乙醇溶液洗脫，將乙醇洗脫液減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，用石油醚脫脂，分離醚層和水層，將水溶液濃縮干燥得到浸膏粉，就是本發(fā)明所述的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位。
所述的中等到強(qiáng)極性溶劑優(yōu)選為乙酸乙酯、乙醇或水，最優(yōu)選0-60％乙醇。我們對(duì)提取溶劑的不同選擇測(cè)定驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位的得率，見(jiàn)下表1。
表1

所述的pH值優(yōu)選為7-10，驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位含量最高。
本發(fā)明所述的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位可以與藥學(xué)上可接受的輔料制備成各種內(nèi)服或外用劑型。
驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位可使黑色素細(xì)胞增殖，酪氨酸的活性提高，黑色素含量增高，驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位對(duì)細(xì)胞免疫、體液免疫具有抑制作用。驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位對(duì)黑色素瘤細(xì)胞系SKMel-19，SKMel-23，Mel-2A，MeWo，Bro.表現(xiàn)出了抑制作用。
附圖簡(jiǎn)介

圖1---驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位在體外對(duì)黑色素細(xì)胞增殖的影響圖2---驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位在體外對(duì)黑色素含量的影響圖3---驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位在體外對(duì)黑色素細(xì)胞內(nèi)酪氨酸酶活性的影響。
圖4---不同藥物對(duì)豚鼠皮膚黑色素細(xì)胞的影響圖5---驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊在外用氫醌后對(duì)豚鼠皮膚黑色素細(xì)胞的影響圖6---驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位給藥前后豚鼠皮膚黑色素細(xì)胞的變化圖7---驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位在體內(nèi)對(duì)小鼠T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響圖8---驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位在體內(nèi)對(duì)小鼠B淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響圖9---驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位對(duì)SRBC致敏小鼠抗體生成的影響圖10---驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位對(duì)小鼠皮膚遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響具體的實(shí)施方案實(shí)施例1將驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊成熟果實(shí)用60％乙醇加熱回流，得到乙醇提取液，減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，調(diào)pH為8，離心分離，得到上清液，將上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂依次用水和乙醇溶液洗脫，將乙醇洗脫液減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，用石油醚脫脂，分離醚層和水層，將水溶液濃縮干燥得到浸膏粉，就是本發(fā)明所述的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位。
實(shí)施例2將驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊成熟果實(shí)用水煎煮，得到提取液，濃縮，得到濃縮液，調(diào)pH為7，離心分離，得到上清液，將上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂依次用水和乙醇溶液洗脫，將乙醇洗脫液減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，用石油醚脫脂，分離醚層和水層，將水溶液濃縮干燥得到浸膏粉，就是本發(fā)明所述的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位。
實(shí)施例3將驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊成熟果實(shí)用95％乙醇加熱回流，得到乙醇提取液，減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，調(diào)pH為10，離心分離，得到上清液，將上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂依次用水和乙醇溶液洗脫，將乙醇洗脫液減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，用石油醚脫脂，分離醚層和水層，將水溶液濃縮干燥得到浸膏粉，就是本發(fā)明所述的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位。
實(shí)施例4將驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊成熟果實(shí)用30％乙醇加熱回流，得到乙醇提取液，減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，調(diào)pH為5，離心分離，得到上清液，將上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂依次用水和乙醇溶液洗脫，將乙醇洗脫液減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，用石油醚脫脂，分離醚層和水層，將水溶液濃縮干燥得到浸膏粉，就是本發(fā)明所述的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位。
實(shí)施例5將驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊成熟果實(shí)用乙酸乙酯加熱回流，得到提取液，減壓回收，濃縮，得到濃縮液，調(diào)pH為2，離心分離，得到上清液，將上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂依次用水和乙醇溶液洗脫，將乙醇洗脫液減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，用石油醚脫脂，分離醚層和水層，將水溶液濃縮干燥得到浸膏粉，就是本發(fā)明所述的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位。
試驗(yàn)例1 驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位的體外藥效學(xué)研究因白癜風(fēng)患者皮損區(qū)的色素細(xì)胞及其功能受損，我們研究了驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊原料藥對(duì)體外培養(yǎng)的人體黑色素細(xì)胞的影響。
因白癜風(fēng)患者皮損區(qū)的色素細(xì)胞及其功能受損，我們研究了紫鉚素對(duì)體外培養(yǎng)的人體黑色素細(xì)胞的影響。
1.1.實(shí)驗(yàn)方案1.1.1篩選模型正常人黑色素細(xì)胞；1.1.2.來(lái)源兒童包皮環(huán)切手術(shù)的多余包皮，無(wú)感染。
1.1.3.培養(yǎng)條件取正常兒童包皮胰酶消化后獲得黑色素細(xì)胞，在DMEM培養(yǎng)基中添加bFGF，CT，TPA，F(xiàn)CS，雙抗等各種因子，5％CO2，37℃條件下培養(yǎng)7天后進(jìn)行傳代，傳代細(xì)胞在上述條件下培養(yǎng)48小時(shí)后加入不同濃度的藥物和對(duì)照，測(cè)定相關(guān)分析指標(biāo)。
1.1.4.測(cè)定方法細(xì)胞增值用MTT法；酪氨酸酶活性測(cè)定用多巴染色法；黑色素含量用堿消化法。
1.2.結(jié)果結(jié)果表明驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊可使黑色素細(xì)胞增殖，酪氨酸的活性提高，黑色素含量增高。見(jiàn)圖1-3。
實(shí)驗(yàn)例2.驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位的體內(nèi)藥效學(xué)研究通過(guò)灌胃給藥和外擦給藥兩種方式觀察驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊制制對(duì)棕色豚鼠體內(nèi)黑色素細(xì)胞在基底層所含比例及顯微結(jié)構(gòu)的影響。
2.1.實(shí)驗(yàn)方案實(shí)驗(yàn)動(dòng)物英國(guó)短毛豚鼠，新疆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
受試藥物設(shè)置驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位(按驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊黃酮計(jì))高濃度組288.21mg/kg(按最大耐受量的1/25計(jì)算)中濃度組144.11mg/kg(按最大耐受量的1/50計(jì)算)低濃度組72.05mg/kg(按最大耐受量的1/100計(jì)算)陽(yáng)性對(duì)照組補(bǔ)骨脂注射液(河南醫(yī)科大學(xué)制藥廠，豫衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1985)第270002號(hào))批號(hào)000405陰性對(duì)照組2.5％氫醌空白對(duì)照組；生理鹽水2.2.動(dòng)物模型的建立先外用氫醌和補(bǔ)骨脂，觀察氫醌、補(bǔ)骨脂注射液對(duì)有色豚鼠皮膚基底層黑色素細(xì)胞的影響外用氫醌后，可使有色豚鼠皮膚基底層增厚，使黑色素生成減少這一結(jié)果與有關(guān)文獻(xiàn)相符；使用補(bǔ)骨脂注射液后，可使有色豚鼠皮膚基底層黑色素細(xì)胞增加。確定模型成立。見(jiàn)圖4。
2.3.不同劑量的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位對(duì)氫醌的拮抗作用外用氫醌，同時(shí)灌服不同劑量的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位觀察不同劑量的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊對(duì)氫醌的拮抗作用，來(lái)間接反映驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊對(duì)有色豚鼠皮膚基底層黑色素細(xì)胞的影響高、中、低劑量的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊組可以拮抗氫醌的作用，使用藥前后有色豚鼠皮膚基底層黑色素細(xì)胞無(wú)顯著性變化(P＞0.05)；但比單用氫醌組有顯著性變化(P＜0.01)，其中高、中、低劑量的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊組之問(wèn)無(wú)顯著性變化(P＞0.05)。見(jiàn)圖5。
2.4.觀察不同劑量驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位對(duì)有色豚鼠皮膚基底層黑色素細(xì)胞的影響使用高、中、低劑量的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊組前后有色豚鼠皮膚基底層黑色素細(xì)胞有顯著性變化(P＜0.05)；高、中、低劑量的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊組之間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)；但在數(shù)值上有變化，其中中劑量組對(duì)有色豚鼠皮膚基底層黑色素細(xì)胞的影響較大；高、中、低劑量的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊組與陽(yáng)性組比無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。見(jiàn)圖6。
實(shí)驗(yàn)例3.驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)的影響3.1.實(shí)驗(yàn)方案3.1.1.實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团囵B(yǎng)昆明系小鼠。
3.1.2.動(dòng)物來(lái)源新疆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
3.1.3.受試藥物設(shè)置驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位(按驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊黃酮計(jì))高濃度組288.21mg/kg(按最大耐受量的1/25計(jì)算)中濃度組144.11mg/kg(按最大耐受量的1/50計(jì)算)低濃度組72.05mg/kg(按最大耐受量的1/100計(jì)算)陽(yáng)性對(duì)照組補(bǔ)骨脂注射液(河南醫(yī)科大學(xué)制藥廠，豫衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1985)第270002號(hào))批號(hào)000405陰性對(duì)照組生理鹽水3.2.結(jié)果由于目前病因研究多支持白癜風(fēng)的發(fā)病與免疫系統(tǒng)有關(guān)，發(fā)現(xiàn)白癜風(fēng)患者體內(nèi)有特異性抗體存在。進(jìn)行驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)影響的研究，結(jié)果顯示驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊對(duì)免疫系統(tǒng)具有抑制作用。見(jiàn)圖7--10。
實(shí)驗(yàn)例4驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位在體外對(duì)黑色素瘤細(xì)胞的影響由于驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位可使黑色素細(xì)胞增殖，我們考察了其在體外對(duì)黑色素瘤細(xì)胞系的影響。
4.1.篩選模型黑色素瘤細(xì)胞系SKMel-19，SKMel-23，Mel-2A，MeWo，Bro；4.2.來(lái)源德國(guó)柏林自由大學(xué)本杰明·富蘭克林醫(yī)學(xué)研究中心。
4.3.培養(yǎng)條件在DMEM培養(yǎng)基中添加FCS，雙抗等各種因子，5％CO2，37℃條件下培養(yǎng)24小時(shí)后加入不同濃度的藥物和對(duì)照，測(cè)定相關(guān)分析指標(biāo)。
4.4.測(cè)定方法細(xì)胞增值用MTT法。
4.5.結(jié)果驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位可對(duì)黑色素瘤細(xì)胞系SKMel-19，SKMel-23，Mel-2A，MeWo，Bro表現(xiàn)出了不同程度的抑制作用。
實(shí)驗(yàn)例5驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位一般藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)資料的研究，對(duì)給藥后小鼠的心、肝、脾、腎、腸進(jìn)行了病理分析，并觀察其活動(dòng)，未見(jiàn)明顯異常。對(duì)麻醉貓的血壓、呼吸頻率、心率均無(wú)明顯影響。
急性毒性實(shí)驗(yàn)表明給藥劑量相當(dāng)于臨床擬用藥量120倍，昆明普系小鼠末出現(xiàn)明顯異常反應(yīng)，觀察7天，動(dòng)物末見(jiàn)死亡。最大耐受量實(shí)驗(yàn)表明給藥劑量相當(dāng)于臨床擬用藥量360倍，觀察7天仍未見(jiàn)死亡，小鼠出現(xiàn)自發(fā)活動(dòng)減少等癥狀。病理學(xué)檢查顯示小鼠肝臟細(xì)胞出現(xiàn)腫脹，可見(jiàn)多處灶性壞死，分裂相增多，脾竇內(nèi)可見(jiàn)散在多核巨細(xì)胞浸潤(rùn)。小鼠口服驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位MTD＞19.23g/kg。
權(quán)利要求
1.驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位，它可以由下列方法獲得將驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊成熟果實(shí)用中等極性到強(qiáng)極性溶劑加熱回流，得到提取液，減壓回收，濃縮，得到濃縮液，調(diào)pH為2～10，離心分離，得到上清液，將上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂依次用水和乙醇溶液洗脫，將乙醇洗脫液減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，用石油醚脫脂，分離醚層和水層，將水溶液濃縮干燥得到浸膏粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位，它可以由下列方法獲得，其中中等極性到強(qiáng)極性溶劑為乙酸乙酯、乙醇或水。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位，它可以由下列方法獲得，其中0-60％的乙醇。
4根據(jù)權(quán)利要求1～3中任何一個(gè)所述的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位，它可以由下列方法獲得，其中pH為7～10。
5.驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位的制備方法，它包括下列步驟將驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊成熟果實(shí)用中等極性到強(qiáng)極性溶劑加熱回流，得到提取液，減壓回收，濃縮，得到濃縮液，調(diào)pH為2～10，離心分離，得到上清液，將上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂依次用水和乙醇溶液洗脫，將乙醇洗脫液減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，用石油醚脫脂，分離醚層和水層，將水溶液干燥得到浸膏粉。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位制備方法，其中中等極性到強(qiáng)極性溶劑為乙酸乙酯、乙醇或水。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位制備方法，其中0-60％的乙醇。
8.根據(jù)權(quán)利要求5～7中任何一個(gè)所述的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位制備方法，其中pH為7～10。
9.權(quán)利要求1～4中任何一個(gè)所述的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位在制備增殖黑色素細(xì)胞、提高酪氨酸酶的活性和增高黑色素含量藥物的用途。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述的藥物為治療色素代謝疾病的藥物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途，其中所述的藥物為治療白癜風(fēng)的藥物。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途，其中所述的藥物為治療白發(fā)的藥物。
13.權(quán)利要求1～4中任何一個(gè)所述的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位在制備抑制免疫系統(tǒng)作用藥物的用途。
14.權(quán)利要求1～4中任何一個(gè)所述的驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位在制備抑制黑色素瘤藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位，它是從驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊成熟果實(shí)用中等極性到強(qiáng)極性溶劑提取得到的。它可使黑色素細(xì)胞增殖，酪氨酸酶的活性提高和黑色素含量增高；對(duì)免疫系統(tǒng)具有抑制作用；對(duì)黑色素瘤有抑制作用。本發(fā)明也涉及該驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊有效部位的制備方法以及在制備治療色素代謝疾病如白癜風(fēng)或白發(fā)的藥物的用途；在制備抑制免疫系統(tǒng)作用藥物的用途和在制備抑制黑色素瘤藥物的用途。
文檔編號(hào)A61P17/00GK1778324SQ20041009149
公開(kāi)日2006年5月31日 申請(qǐng)日期2004年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月26日
發(fā)明者尚靖, 徐建國(guó), 于魯海, 孫力, 李紅健, 朱衛(wèi)江, 劉文麗, 曹麗蒙 申請(qǐng)人:烏魯木齊瑞普藥物研究開(kāi)發(fā)有限公司, 新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院, 尚靖