專利名稱：聯(lián)用單克隆抗體在治療急性損傷所致局部水腫上的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是有關(guān)聯(lián)合應(yīng)用抗細(xì)胞間粘附分子-1單克隆抗體(anti-ICAM-1 monoclonal antibody)和抗選擇素類分子單克隆抗體(anti-Selectinmonoclonal antibodies)，在治療急性損傷引起的局部水腫上的新用途，涉及生物制藥領(lǐng)域.
背景技術(shù)：
單克隆抗體是一類蛋白質(zhì)分子，在基礎(chǔ)研究，臨床診斷和治療，疾病預(yù)防有廣泛的應(yīng)用.自80年代末90年代初興起的噬菌體基因庫技術(shù)和基因工程重組抗體技術(shù)領(lǐng)域的發(fā)展，使單克隆抗體技術(shù)由基礎(chǔ)研究轉(zhuǎn)入實(shí)際應(yīng)用研究和開發(fā)。目前美國FDA批準(zhǔn)上市的67種生物制品中，治療和預(yù)防用單克隆抗體和基因工程抗體就有9種，待批的有36種。其開發(fā)前景已獲廣泛肯定。蛋白質(zhì)種內(nèi)繁多，機(jī)體內(nèi)每一生理，病理過程涉及眾多蛋白質(zhì)，目前單一單克隆抗體的生物制劑已不能滿足需要，單克隆抗體聯(lián)合應(yīng)用是一個新的發(fā)展方向。正如雞尾酒療法開創(chuàng)了愛滋病治療的新紀(jì)元一樣。急性損傷是一個很常見的健康問題，常見于車禍，運(yùn)動損傷，燒傷，戰(zhàn)傷，又常繼發(fā)于心肌梗塞，腦血管意外，手術(shù)(器官移植，整容及內(nèi)臟大型手術(shù))等。損傷的病理過程較復(fù)雜，在肌體受到傷害的同時，肌體本身的白細(xì)胞系統(tǒng)，激肽系統(tǒng)，補(bǔ)體系統(tǒng)，血管內(nèi)皮系統(tǒng)等被激活，對受傷的組織產(chǎn)生反應(yīng)，就會有紅，腫，熱，痛.這種急性局部水腫常常阻礙肌體的恢復(fù)，甚至使治療失敗。
機(jī)體損傷后白細(xì)胞和損傷處血管內(nèi)皮的交互作用是引起損傷后局部水腫的主要因素.細(xì)胞間粘附分子-1和選擇素類分子在此過程中起著重要的信號傳遞作用。
細(xì)胞間粘附分子-1是一種糖蛋白，多存在血管內(nèi)皮細(xì)胞上，選擇素分子目前已知有白細(xì)胞選擇素(L-selectin)，內(nèi)皮選擇素(E-selectin)和血小板選擇素(P-selectin)亦多表達(dá)在白細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞上.在機(jī)體受損時，細(xì)胞間粘附分-1(ICAM-1)和選擇素類分子(Selectins)會在受損而激活的內(nèi)皮細(xì)胞上和白細(xì)胞上表達(dá)增加，這些分子幫助白細(xì)胞集合在損傷部位，附在血管內(nèi)皮，透過血管壁進(jìn)入損傷部位，此過程中白細(xì)胞對血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生損害，使內(nèi)皮細(xì)胞間間隙加大，導(dǎo)致滲出增多，引起局部水腫。
目前尚無治療急性損傷后局部水腫的藥物，臨床上是等待局部水腫的自然消退，這樣常增加了患者的危險(xiǎn)，阻礙了恢復(fù)，也增加了患者的費(fèi)用。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服目前對急性損傷后局部水腫無藥治療的不足，本專利提供聯(lián)合應(yīng)用細(xì)胞間粘附分子-1單克隆抗體和抗選擇素類分子的單克隆抗體來治療損傷后局部水腫這一新的用途。
本專利聯(lián)合應(yīng)用義為1.抗細(xì)胞間粘附分子-1單克隆抗體(anti-ICAM-1 monoclonal antibody)和抗內(nèi)皮選擇素單克隆抗體(anti-E-Selectin monoclonal antibody)。
2.抗細(xì)胞間粘附分子-1單克隆抗體(anti-ICAM-1 monoclonal antibody)和抗白細(xì)胞選擇素單克隆抗體(anti-L-Selectin monoclonal antibody)。
3.抗細(xì)胞間粘附分子-1單克隆抗體(anti-ICAM-1 monoclonal antibody)和抗血小板選擇素單克隆抗體(anti-P-Selectin monoclonal antibody)。
本發(fā)明是利用抗細(xì)胞間粘附分子-1單克隆抗體和抗選擇素類分子單克隆抗體可阻斷細(xì)胞間粘附分子-1和選擇素類分子幫助白細(xì)胞粘附到血管內(nèi)皮上的特性，從而阻斷白細(xì)胞在急性損傷過程中對血管內(nèi)皮產(chǎn)生損害而導(dǎo)致的滲出增多，進(jìn)而產(chǎn)生治療水腫的效果.本發(fā)明用特定波長的光(非熱效應(yīng)性光源)照射注射有光敏劑的動物皮膚，在照射部位產(chǎn)生急性組織損傷并引起局部水腫為動物模型，然后立即經(jīng)靜脈或腹腔注射抗細(xì)胞間粘附分子-1單克隆抗體(anti-ICAM-1 monoclonal antibody)和抗選擇素類分子單克隆抗體(anti-Selectin monoclonal antibodies)，用抗白細(xì)胞選擇素分子單克隆抗體(anti-L-Selectin antibody)為對照抗體，此為目前唯一進(jìn)入2期臨床實(shí)驗(yàn)的治療急性損傷的藥物(美國蛋白質(zhì)設(shè)計(jì)試驗(yàn)室Protein Design Lab)，在損傷后36小時內(nèi)，每隔6小時重復(fù)注射，并測量光照處水腫面積，記錄結(jié)果，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析并制圖。
在本發(fā)明的動物試驗(yàn)中，聯(lián)合應(yīng)用抗細(xì)胞間粘附分子-1單克隆抗體和抗內(nèi)皮選擇素分子單克隆抗體產(chǎn)生良好效果，在光照射后48小時內(nèi)完全抑制局部水腫的產(chǎn)生，經(jīng)統(tǒng)計(jì)和其他2組有顯著性差異，P＜0.01。


在附圖中，X軸表示每隔6小時所測量的分組資料，測量時間分別為光照射和注射抗體后6小時，12小時，18小時，24小時，30小時，36小時，Y軸表示水腫面積，結(jié)果用平方厘米表示，所有結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P＜0.01。柱1表示該組小鼠在光照后，接受靜脈注射大白鼠Ig G 2a，30微克/小鼠，每6小時注射一次。
柱2表示該組小鼠在光照后，接受靜脈注射細(xì)胞間粘附分子-1單克隆抗體和內(nèi)皮選擇素分子單克隆抗體各30微克/小鼠，每6小時注射一次。柱2在圖中為空白，表示該組小鼠的光照處在測量時水腫面積為0。
柱3表示該組小鼠在光照后，接受靜脈注射抗白細(xì)胞選擇素分子單克隆抗體30微克/小鼠，每6小時注射一次。
所有小鼠的局部水腫在光照射40小時后，面積難以測量，故未制圖。
具體實(shí)施例方式以下對本發(fā)明作詳細(xì)說明，但不意味著限制本發(fā)明的內(nèi)容。試驗(yàn)基本準(zhǔn)備動物試驗(yàn)用昆明小白鼠，17-20克重(同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)動物試驗(yàn)中心)，雌雄各半，試驗(yàn)前一天用電動理發(fā)刀剃掉小鼠背部毛發(fā)，并使用市售退毛劑去掉殘余毛根，然后經(jīng)尾靜脈注入血卟啉衍生物(HematoporphyrinDerivative，HPD，購自Trend Pharma&Tech Ltd.)，劑量5毫克/公斤，24小時后用激光治療儀ALA 600型(武昌激光設(shè)備廠)波長630nm，照射劑量60J/平方厘米.所有試驗(yàn)用小鼠分為3組第1組-該組小鼠在光照后，立即經(jīng)尾靜脈注射大白鼠Ig G2a，30微克/小鼠，每6小時注射一次，作為對照。
第2組-該組小鼠在光照后，立即經(jīng)尾靜脈注射抗細(xì)胞間粘附分子-1單克隆抗體(anti-ICAM-1 monoclonal antibody，購自PharMingen公司)和抗內(nèi)皮選擇素分子單克隆抗體(anti-E-Selectinmonoclonal antibody，購自PharMingen公司)各30微克/小鼠，每6小時注射一次。
第3組 該組小鼠在光照后，立即經(jīng)尾靜脈注射白細(xì)胞選擇素分子單克隆抗體(anti-L-Selectin monoclonal antibody，購自PharMingen公司)30微克/小鼠，每6小時注射一次。
測量時間分別為光療和注射抗體后 6小時，12小時，18小時，24小時，30小時，36小時。用游標(biāo)卡尺測量，紀(jì)錄測量結(jié)果，因水腫面積近似于橢園形，所以測量結(jié)果經(jīng)公式面積＝A/2×B/2×3.14計(jì)算，其中A表示測量的長軸，B表示測量的短軸，結(jié)果用平方厘米表示，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理(P＜0.01)后，結(jié)果制圖如附圖。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明是有關(guān)聯(lián)合抗細(xì)胞間粘附分子-1單克隆抗體(anti-ICAM-1 monoclonalantibody)和抗選擇素類單克隆抗體(anti-Selectin monoclonal antibodies)在治療急性損傷所致局部水腫上的應(yīng)用，此新用途可用于國家一類新藥的開發(fā)，
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的本發(fā)明的聯(lián)合應(yīng)用單克隆抗體為下列組合一.抗細(xì)胞間粘附分子-1單克隆抗體(anti-ICAM-1 monoclonal antibody)和抗內(nèi)皮選擇素單克隆抗體(anti-E-Selectin monoclonal antibody)二.抗細(xì)胞間粘附分子-1單克隆抗體(anti-ICAM-1 monoclonal antibody)和抗白細(xì)胞選擇素單克隆抗體(anti-L-Selectin monoclonal antibody)三.抗細(xì)胞間粘附分子-1單克隆抗體(anti-ICAM-1 monoclonal antibody)和抗血小板選擇素單克隆抗體(anti-P-Selectin monoclonal antibody)
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的本發(fā)明的應(yīng)用對象是人或動物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的本發(fā)明的每一種單克隆抗體的應(yīng)用劑量是0.5毫克/每公斤體重-5毫克/每公斤體重。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的本發(fā)明在治療急性損傷所致局部水腫上的治療時，每4-6小時重復(fù)注射一次。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的本發(fā)明的應(yīng)用途徑是經(jīng)靜脈注射或經(jīng)腹腔注射，或經(jīng)靜脈注射和經(jīng)腹腔注射結(jié)合。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的本發(fā)明所用單克隆抗體義為可結(jié)合細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)和選擇素類分子(Selectins)的單克隆抗體和功能上的類似物，如來自此二抗體的片段，抗體的重組形式，抗體的人源化形式。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的本發(fā)明所用攜帶抗體的注射用液為0.9％生理鹽水或其它臨床靜脈注射稀釋用液體。
全文摘要
本發(fā)明是有關(guān)聯(lián)合抗細(xì)胞間粘附分子－1單克隆抗體和抗選擇素分子類單克隆抗體用于治療急性損傷引起的局部水腫的臨床上新用途，涉及生物制藥領(lǐng)域。聯(lián)合應(yīng)用抗細(xì)胞間粘附分子－1單克隆抗體和抗選擇素分子類單克隆抗體去阻斷損傷處血管內(nèi)皮吸引白細(xì)胞的信號傳遞，抑制此過程中白細(xì)胞對血管內(nèi)皮產(chǎn)生損害所造成的滲出增多而引起的局部水腫，產(chǎn)生良好的臨床效果，此新用途為國內(nèi)外首創(chuàng)。
文檔編號A61K39/395GK1473622SQ0213890
公開日2004年2月11日 申請日期2002年8月9日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月9日
發(fā)明者孫京海 申請人:孫京海