一種闊葉十大功勞提取物及其制備方法和在抗煙草黑脛病中的應(yīng)用
【專利摘要】一種闊葉十大功勞提取物，是以闊葉十大功勞為提取原料，以乙醇溶液作為提取溶劑，經(jīng)至少兩次加熱醇提、醇提液再經(jīng)減壓濃縮后制備得到；制備的具體步驟為：先將原料及乙醇溶液加入提取容器中；開啟加熱裝置對提取容器加熱，一次提取完成后進行抽濾，將所得的濾渣再次加入到提取容器中，開啟加熱裝置對提取容器加熱，二次提取完成后進行抽濾，合并一次醇提液和二次醇提液，然后置于濃縮設(shè)備中進行減壓濃縮得到膏狀的闊葉十大功勞提取物，保存?zhèn)溆谩１景l(fā)明的提取物具有高效低毒、容易降解無殘留、無污染、生態(tài)環(huán)保、成本低等優(yōu)點，可以用于防治煙草黑脛病。
【專利說明】
一種闊葉十大功勞提取物及其制備方法和在抗煙草黑脛病中 的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于植物源制劑殺菌技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種十大功勞提取物及其制備方 法和在抗煙草黑脛病中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 煙草黑腔病Phytophthora parasitica var.nicotianae(Vann Breda de Haan) 是我國煙草主要病害之一，在中國煙草平均發(fā)病率為5%~12%，嚴(yán)重田塊發(fā)病率高達 75%，甚至造成絕收，給煙草生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟損失。據(jù)不完全統(tǒng)計，在1989-1991年的 煙草生產(chǎn)中，煙草花葉病毒病、赤星病、黑脛病、青枯病和根結(jié)線蟲病5種主要病害導(dǎo)致的產(chǎn) 值損失超過15億元。這5種病害中，煙草黑脛病導(dǎo)致的經(jīng)濟損失高達3.69億元，黑脛病一旦 發(fā)生就會迅速蔓延，危害煙株健康，甚至造成煙田絕收，嚴(yán)重影響煙葉生產(chǎn)。
[0003] 如今，化學(xué)防治雖然仍然是主要的防治措施，但許多化學(xué)殺菌劑對煙葉的質(zhì)量、生 態(tài)環(huán)境產(chǎn)生巨大的影響，已不能適應(yīng)社會的發(fā)展。以植物提取物作為殺菌劑，具有易降解、 不污染環(huán)境、無殘留的優(yōu)點，同時，病原菌不易產(chǎn)生抗藥性，對病原菌有很強的控制作用，因 此，利用植物提取物來防治煙草黑脛病，對提高煙葉品質(zhì)、保障其安全性以及保持生態(tài)平衡 具有十分重要的意義。然而，現(xiàn)有技術(shù)中涉及防治煙草黑脛病的植物提取物的報導(dǎo)相對較 少，今早開發(fā)一種高效、低毒、廣譜、不易產(chǎn)生抗性且低成本的植物提取物來防治煙草黑脛 病，就成為本領(lǐng)域人員亟待解決的技術(shù)難題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，克服以上【背景技術(shù)】中提到的不足和缺陷，提供一 種高效低毒、容易降解無殘留、無污染、生態(tài)環(huán)保、成本低的闊葉十大功勞提取物，還相應(yīng)提 供一種工藝簡單、操作簡便、原料來源廣泛、成本低的闊葉十大功勞提取物的制備方法以及 其在抗煙草黑脛病中的應(yīng)用。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提出的技術(shù)方案為一種闊葉十大功勞提取物，所述 闊葉十大功勞提取物是以闊葉十大功勞為提取原料，以乙醇溶液作為提取溶劑，經(jīng)至少兩 次加熱醇提、醇提液再經(jīng)減壓濃縮后制備得到。
[0006] 本發(fā)明上述技術(shù)方案的一大特點在于：首次提出了以藥用植物闊葉十大功勞 (Mahonia bealei (Fort. )Carr)作為提取原料，來制備抗煙草黑腔病的藥劑。闊葉十大功勞 的根莖中含有小檗堿、掌葉防己堿、藥根堿、木蘭堿等多種生物堿，具有清熱解毒、消炎止痛 的功效，對金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌、大腸菌有抑制作用，主治人體的痢疾、胃腸炎、傳染 性肝炎、支氣管炎等疾病，但是幾乎沒有人提出過將闊葉十大功勞應(yīng)用于煙草黑脛病的防 治。我們將其應(yīng)用于煙草黑脛病的防治上，這是我們經(jīng)過反復(fù)研究對比后的重大發(fā)現(xiàn)，在現(xiàn) 有抗煙草黑脛病的植物提取藥劑中幾乎沒有涉及到闊葉十大功勞這一原料，我們經(jīng)過大量 試驗研究，發(fā)現(xiàn)闊葉十大功勞提取物對煙草黑脛病具有極好的抑制作用。
[0007] 上述藥用植物闊葉十大功勞的植物形態(tài)特征為小檗科十大功勞屬植物，別名：十 大功勞、黃天竹、土黃柏、貓兒刺、土黃連、八角刺、刺黃柏；葉倒卵形至倒卵狀披針形，總狀 花序，花黃色；花瓣長圓形；花期7-9月，果期9-11月。闊葉十大功勞屬暖溫帶植物，抗逆性 強、生物量大，也可進行人工栽培生產(chǎn)，作為植物源農(nóng)藥開發(fā)的原材料來源完全可以得到保 障，開發(fā)潛力大，具有良好的市場前景。
[0008] 作為一個總的技術(shù)構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種上述的闊葉十大功勞提取物的制備方 法，包括以下步驟：
[0009] (1)稱取闊葉十大功勞作為原料，將原料及乙醇溶液加入提取容器中；
[0010] (2)開啟加熱裝置對提取容器加熱，控制加熱溫度不超過100°C，提取時間不少于 20min，一次提取完成后進行抽濾，得到一次醇提液和濾渣；
[0011] (3)將所得的濾渣再次加入到提取容器中，開啟加熱裝置對提取容器加熱，控制加 熱溫度不超過l〇〇°C，提取時間不少于20min，二次提取完成后進行抽濾，得到二次醇提液和 濾渣；
[0012] (4)合并所述的一次醇提液和二次醇提液，然后至于濃縮設(shè)備中進行減壓濃縮得 到膏狀的闊葉十大功勞提取物，保存?zhèn)溆谩?br>[0013] 上述的制備方法，優(yōu)選的，所述乙醇溶液的體積百分?jǐn)?shù)控制在70%-80%。
[0014] 上述的制備方法，優(yōu)選的，所述步驟(1)中，原料與乙醇溶液的質(zhì)量比控制在1/(6-10)〇
[0015]上述的制備方法，優(yōu)選的，所述步驟(2)和步驟(3)中，提取時的加熱溫度控制在90 。(:_95°C，提取時間控制在25min-35min。
[0016] 上述的制備方法，優(yōu)選的，所述步驟（3)中，二次提取時濾渣與乙醇溶液的質(zhì)量比 控制在1/(3-5)。
[0017] 上述的制備方法，優(yōu)選的，所述步驟(4)中，所述濃縮設(shè)備為旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，減壓濃縮 時的轉(zhuǎn)速為60_75r/min;制冷溫度為-2°C . _10°C。.
[0018] 作為一個總的技術(shù)構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種上述本發(fā)明的闊葉十大功勞提取物在 抗煙草黑脛病中的應(yīng)用。
[0019] 本發(fā)明在制得上述的闊葉十大功勞提取物后，采用室內(nèi)毒力測定(平板抑菌試驗 法)及活體藥效試驗(大田盆栽試驗)相結(jié)合的方法，測試該本發(fā)明的提取物對煙草黑脛病 的防治作用。室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明：在平板抑菌試驗中，本發(fā)明的提取物對黑脛病病原菌 的抑菌圈直徑平均約為〇.6cm，試驗結(jié)果表明該提取物的制劑對煙草黑脛病病原菌具有較 強的抑制活性。而盆栽活體試驗結(jié)果表明：本發(fā)明的闊葉十大功勞提取物對盆栽煙草黑脛 病表現(xiàn)出了較好的防治效果，對煙草黑脛病的防治效果可高達80%左右。
[0020] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：
[0021] 1.本發(fā)明采用的闊葉十大功勞提取物是植物源制劑，利用本發(fā)明生產(chǎn)的提取物對 煙草黑脛病具有較好的離體及盆栽防治效果，可用于煙草黑脛病的有效防治。
[0022] 2.本發(fā)明的闊葉十大功勞提取物還具有容易降解、無殘留的優(yōu)點，其推廣應(yīng)用必 然可減少其他金屬類化學(xué)藥劑的施入，降低了土壤農(nóng)殘，對環(huán)境無污染，綠色、生態(tài)、環(huán)保。
[0023] 3.本發(fā)明的闊葉十大功勞提取物提取工藝流程簡單，操作方便，容易提取生產(chǎn)。
[0024] 4.本發(fā)明的闊葉十大功勞植物分布廣，容易大面積栽培生產(chǎn)，原料來源廣，生產(chǎn)成 本低，將其開發(fā)成抗煙草黑脛病用殺菌藥劑，可有效提高闊葉十大功勞的資源利用率，具有 較好的應(yīng)用前景。
【附圖說明】
[0025] 為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發(fā)明 的一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù) 這些附圖獲得其他的附圖。
[0026] 圖1為本發(fā)明【具體實施方式】中對黑脛病菌抑制效果的對比照片;其中：CK是無菌水 對照、乙醇CK是5 %的乙醇溶液、處理12是指用5 %的乙醇溶液溶解的闊葉十大功勞提取物 溶劑。
【具體實施方式】
[0027] 為了便于理解本發(fā)明，下文將結(jié)合說明書附圖和較佳的實施例對本發(fā)明作更全 面、細致地描述，但本發(fā)明的保護范圍并不限于以下具體的實施例。
[0028] 除非另有定義，下文中所使用的所有專業(yè)術(shù)語與本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的含義 相同。本文中所使用的專業(yè)術(shù)語只是為了描述具體實施例的目的，并不是旨在限制本發(fā)明 的保護范圍。
[0029] 除非另有特別說明，本發(fā)明中用到的各種原材料、試劑、儀器和設(shè)備等均可通過市 場購買得到或者可通過現(xiàn)有方法制備得到。
[0030] 實施例：
[0031 ] -種本發(fā)明的闊葉十大功勞提取物，該闊葉十大功勞提取物是以闊葉十大功勞為 提取原料，以乙醇溶液作為提取溶劑，經(jīng)至少兩次加熱醇提、醇提液再經(jīng)減壓濃縮后制備得 到。
[0032] 本實施例中闊葉十大功勞提取物的制備方法，具體包括以下步驟：
[0033] (1)首先將闊葉十大功勞粉碎，過200目篩，稱取100.00g闊葉十大功勞作為原料， 倒入一電熱套圓形瓶中，再將75%的乙醇溶液1000ml加入電熱套圓形瓶中；
[0034] (2)開啟加熱裝置(電熱套)對電熱套圓形瓶加熱，控制加熱溫度為95°C，提取時間 為30min，一次提取完成后進行抽濾，得到一次醇提液和濾渣；
[0035] (3)將所得的濾渣再次加入到電熱套圓形瓶中，并倒入75%的酒精500ml，開啟加 熱裝置對電熱套圓形瓶加熱，控制加熱溫度為95°C，提取時間為30min，二次提取完成后進 行抽濾，得到二次醇提液和濾渣；
[0036] (4)合并所述的一次醇提液和二次醇提液，然后置于濃縮設(shè)備旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀圓形瓶 中（不超越總體積1/3)進行減壓濃縮、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至膏狀(旋轉(zhuǎn)參數(shù):60-75r/min;制冷溫度 2.0°C~10°C )，得到膏狀的闊葉十大功勞提取物，將其倒入瓶中，做好記載，貼好標(biāo)簽，保存 至冰箱中備用。
[0037]應(yīng)用實施例1:平板抑菌試驗。
[0038]采用菌絲生長速率法生物測定技術(shù)進行測定。
[0039]先將上述實施例中得到的闊葉十大功勞提取物用5%的乙醇溶液溶解，配制成500 倍濃度溶液備用，用打孔器在長滿煙草黑脛病病原菌的培養(yǎng)基上切取菌餅，將菌餅放入提 取物溶液中浸泡5分鐘，再轉(zhuǎn)移到無菌空培養(yǎng)皿(直徑90mn)中，置于25°C恒溫箱中培養(yǎng)，3天 和5天后，以5%的乙醇溶液和無菌水作為空白對照，用十字交叉法測定抑菌圈直徑。實驗結(jié) 果如圖1和下表1所示。
[0040] 表1:所示闊葉十大功勞提取物對黑脛病病原菌的抑制果。
[0041]
[0042]以上實驗結(jié)果表明，闊葉十大功勞提取物對煙草黑脛病病原菌的抑菌圈直徑平均 值為0.58cm，而5 %乙醇對照的菌圈直徑平均值4.63cm，清水對照菌圈直徑平均值5.23cm， 這表明上述制備方法獲得的闊葉十大功勞提取物對煙草黑脛病病原菌的生長有明顯的抑 制作用。
[0043]應(yīng)用實施例2:盆栽活體實驗。
[0044] 1.黑脛病病原菌由我們自行培養(yǎng)制備，闊葉十大功勞提取物采用本發(fā)明上述實施 例所述的方法制備獲得的提取物，陽性對照藥劑為精甲霜靈錳鋅懸浮劑(市購），空白對照 為清水。
[0045] 2.供試煙苗采用的烤煙品種為K326，試驗盆為直徑33cm、高35cm的塑料桶，裝土， 將長勢一致的煙苗栽入盆中，供試驗用。
[0046] 3.接種及調(diào)查方法。接種方法為灌根接種。接種的游動孢子液方法為:將在培養(yǎng)基 平板上培養(yǎng)了 7d的煙草黑脛病菌的菌絲連同培養(yǎng)基產(chǎn)生大量的孢子囊后加無菌水搗碎，制 成含有游動孢子的懸浮液每株煙灌l(xiāng)〇〇ml孢子液，灌根前松動根標(biāo)土壤，造成根系微傷口。 接種后每天澆水1次保濕。接種后的煙株置于自然條件進行常規(guī)管理，病原菌接種后第24小 時進行第一次施藥，施藥方法為灌根，空白對照每株灌l(xiāng)〇〇〇ml無菌水，陽性對照灌1000ml甲 霜靈錳鋅，試驗對象每株灌l(xiāng)〇〇〇ml闊葉十大功勞提取物溶液，施藥濃度為500倍液。一周以 后進行第二次施藥。接種后30d調(diào)查各處理的發(fā)病情況，計算病情指數(shù)及防治效果。
[0047] 4.病情分級
[0048] 0級:全株無病。
[0049] 1級:莖部病斑不超過莖圍的三分之一，或三分之一以下葉片凋萎。
[0050] 3級:莖部病斑環(huán)繞莖圍三分之一至二分之一，或三分之一至二分之一葉片輕度凋 萎，或下部少數(shù)葉片出現(xiàn)病斑。
[0051 ] 5級：莖部病斑超過莖圍的二分之一，但未全部環(huán)繞莖圍，或二分之一至三分之二 葉片凋萎。
[0052] 7級:莖部病斑全部環(huán)繞莖圍，或三分之二以上葉片凋萎。
[0053] 9級:病株基本枯死。
[0054] 5.調(diào)查數(shù)據(jù)及計算
[0055]藥效計算方法參照以下方法進行：
[0056]
[0057]
[0058]
[0059] 6.試驗結(jié)果
[0060] 通過盆栽試驗發(fā)現(xiàn)，通過接種黑脛病病原菌后，各處理均有一定的發(fā)病，與清水對 照（不施藥)相比較，CK藥劑和闊葉十大功勞提取物的發(fā)病率、病情指數(shù)和防治效果均存在 極顯著差異，具體數(shù)據(jù)見下表2,這說明闊葉十大功勞提取物對煙草黑脛病有極顯著的防治 效果。
[0061 ]表2:闊葉十大功勞提取物防治黑脛病的防治效果（％ )
[0062]
【主權(quán)項】
1. 一種闊葉十大功勞提取物，其特征在于，所述闊葉十大功勞提取物是以闊葉十大功 勞為提取原料，以乙醇溶液作為提取溶劑，經(jīng)至少兩次加熱醇提、醇提液再經(jīng)減壓濃縮后制 備得到。2. -種如權(quán)利要求1所述的闊葉十大功勞提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步 驟： (1) 稱取闊葉十大功勞作為原料，將原料及乙醇溶液加入提取容器中； (2) 開啟加熱裝置對提取容器加熱，控制加熱溫度不超過100°C，提取時間不少于 20min，一次提取完成后進行抽濾，得到一次醇提液和濾渣； (3) 將所得的濾渣再次加入到提取容器中，開啟加熱裝置對提取容器加熱，控制加熱溫 度不超過l〇〇°C，提取時間不少于20min，二次提取完成后進行抽濾，得到二次醇提液和濾 渣； (4) 合并所述的一次醇提液和二次醇提液，然后置于濃縮設(shè)備中進行減壓濃縮得到膏 狀的闊葉十大功勞提取物，保存?zhèn)溆谩?. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述乙醇溶液的體積百分?jǐn)?shù)控制在 70%-80%〇4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（1)中，原料與乙醇溶液的質(zhì) 量比控制在1/(6-10)。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)和步驟(3)中，提取時的 加熱溫度控制在90°C-95°C，提取時間控制在25min-35min。6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中，二次提取時濾渣與乙 醇溶液的質(zhì)量比控制在1/(3-5)。7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)中，所述濃縮設(shè)備為旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀，減壓濃縮時的轉(zhuǎn)速為60_75r/min;制冷溫度為-2°C_10°C。8. -種如權(quán)利要求1所述的或者如權(quán)利要求2-7中任一項所述制備方法獲得的闊葉十 大功勞提取物在抗煙草黑脛病中的應(yīng)用。
【文檔編號】A01N65/08GK105994386SQ201610383334
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月2日
【發(fā)明人】周佳民, 巢進, 朱三榮, 宋榮, 曹亮, 朱校奇
【申請人】湖南省農(nóng)業(yè)生物資源利用研究所