一種用于移植供肺灌流的肺灌流液及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種用于移植供肺灌流的肺灌流液及其制備方法，可以提供良好的肺保護(hù)和復(fù)蘇作用，能夠滿足移植供肺的灌流和保存需要；同時(shí)灌流時(shí)間較長，在經(jīng)本發(fā)明的肺灌流液6小時(shí)灌流后的供肺仍然能夠保有良好的肺順應(yīng)性和氧合能力；最后，本發(fā)明的制備方法簡單，原材料容易獲得且經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，適合在一般的實(shí)驗(yàn)室或醫(yī)院推廣應(yīng)用。
【專利說明】
-種用于移植供肺灌流的肺灌流液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)學(xué)生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種用于移植供肺灌流的肺灌流液及其 制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 肺移植化ung化ansplantation,LTx)已經(jīng)成為藥物或外科手術(shù)無法治療的終末 期肺疾病的標(biāo)準(zhǔn)治療方式。目前符合標(biāo)準(zhǔn)的供體肺數(shù)目已經(jīng)無法滿足移植需求，造成部分 患者在等待供肺的過程中死亡。目前可改善供肺短缺現(xiàn)狀的方法中，離體肺灌注化X Vivo Lung Perfusion，E化P)是應(yīng)用于肺移植領(lǐng)域一種延長供肺保存時(shí)間和修復(fù)供肺損傷的技 術(shù)。EVLP可W即時(shí)評估供體肺功能，為藥物甚至基因治療提供平臺(tái)，改善"邊緣供肺" (Marginal Donor Lungs)功能，增加了符合移植條件移植肺的數(shù)量，在一定程度上緩解了 供肺缺乏的現(xiàn)狀。Steen等用基于perfadex液的灌流液應(yīng)用于改善"邊緣供肺"功能，3例"邊 緣供肺"通過EVLP灌注(61~121min)后成功移植。由于國外優(yōu)質(zhì)的灌流液配方保密，國內(nèi)的 肺灌流液的配方及配置工藝并不能滿足移植供肺灌流的需要，肺保護(hù)和復(fù)蘇作用不強(qiáng)，灌 流時(shí)間短是通常存在的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)中的上述問題提出的一種配制簡單，同時(shí)肺保護(hù)和復(fù)蘇作 用，且灌流時(shí)間長的用于移植供肺灌流的肺灌流液及其制備方法。
[0004] 為了實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)措施為：
[0005] -種用于移植供肺灌流的肺灌流液，由純化水、右旋糖巧20、氯化鋼、氯化鐘、硫酸 儀、無水憐酸氨二鋼、憐酸二氨鐘、葡萄糖、氯化巧、白蛋白、硝酸甘油、甲強(qiáng)龍、肝素鋼、頭抱 挫嘟鋼及緩沖劑配置而成。
[0006] 為了進(jìn)一步優(yōu)化上述技術(shù)方案，本發(fā)明所采取的技術(shù)措施還包括：
[0007] 優(yōu)選地，本發(fā)明的肺灌流液在配制中，W1L純化水作為溶劑計(jì)，內(nèi)含有40-60g右旋 糖巧20、6-10g氯化鋼、0.2-0.6g氯化鐘、0.09-0 . Ig硫酸儀、0.04-0.05g無水憐酸氨二鋼、 0.06-0.07g憐酸二氨鐘、0.8-0.9g葡萄糖、0.05-0.07g氯化巧、30-60g白蛋白、l-4mg硝酸甘 油、200-300mg甲強(qiáng)龍、4000-6000U肝素鋼及0.4-0.6g頭抱挫嘟鋼，并使用Tri S-HC1緩沖劑 調(diào)節(jié)抑至7.4-7.6。。
[000引更加優(yōu)選地，上述肺灌流液的配制中，W1L純化水作為溶劑計(jì)，內(nèi)含有50g右旋糖 巧20、8g氯化鋼、0.4g氯化鐘、0.098g硫酸儀、0.046g無水憐酸氨二鋼、0.06?憐酸二氨鐘、 0.9g葡萄糖、0.06g氯化巧、50g白蛋白、2mg硝酸甘油、250mg甲強(qiáng)龍、5000U肝素鋼及0.5g頭 抱挫嘟鋼，使用Tris-肥1緩沖劑調(diào)節(jié)抑至7.5。
[0009] 另一方面，本發(fā)明還提供一種如權(quán)利要求1所述的用于移植供肺灌流的肺灌流液 的制備方法，包括W下步驟：
[0010] 步驟1，基本液的配制
[0011] 取右旋糖酢加熱溶于純化水中，依次加入氯化鋼、氯化鐘、硫酸儀、無水憐酸氨二 鋼、憐酸二氨鐘和葡萄糖，使用化is-肥1緩沖劑調(diào)抑至7.4-7.6,使用細(xì)菌濾器過濾，補(bǔ)入純 化水定容，得到基本液；
[0012] 步驟2,預(yù)灌流液的配制
[0013] 向步驟1中得到的基本液中依次加入氯化巧、白蛋白及硝酸甘油，使用Tris-肥1緩 沖劑調(diào)抑至7.4-7.6，使用細(xì)菌濾器過濾，得到預(yù)灌流液；
[0014] 步驟3,制備肺灌流液
[0015] 向步驟2中得到的預(yù)灌流液加入甲強(qiáng)龍、肝素鋼及頭抱挫嘟鋼得到用于移植供肺 灌流的肺灌流液。
[0016] 上述的制備方法中，步驟1中基本液的配制優(yōu)選為:為取50g右旋糖酢20加熱溶于 純化水中，依次加入8g氯化鋼、0.知氯化鐘、0.09?硫酸儀、0.046g無水憐酸氨二鋼、0.063g 憐酸二氨鐘和0.9g葡萄糖，使用化i S-肥1緩沖劑調(diào)pH至7.4-7.6，使用細(xì)菌濾器過濾，補(bǔ)入 純化水定容至1000ml，得到基本液。
[0017] 上述的制備方法中，步驟2中步驟2中預(yù)灌流液的配制為向所述步驟1中得到的基 本液中依次加入0.06g氯化巧、50g白蛋白及2mg硝酸甘油，使用Tr i S-肥1緩沖劑調(diào)抑至7.4- 7.6，使用細(xì)菌濾器過濾，得到預(yù)灌流液。
[0018] 上述的制備方法中，步驟3中制備肺灌流液為向所述步驟2中得到的預(yù)灌流液加入 250mg甲強(qiáng)龍、5000U肝素鋼及0.5g頭抱挫嘟鋼得到用于移植供肺灌流的肺灌流液。
[0019] 進(jìn)一步地，上述細(xì)菌濾器的孔徑優(yōu)選為0.22皿。
[0020] 本發(fā)明采用上述技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下技術(shù)效果：
[0021] 本發(fā)明提供的用于移植供肺灌流的肺灌流液，首先可W提供良好的肺保護(hù)和復(fù)蘇 作用，能夠滿足移植供肺的灌流和保存需要;其次灌流時(shí)間較長，在經(jīng)本發(fā)明的肺灌流液6 小時(shí)灌流后的供肺仍然能夠保有良好的肺順應(yīng)性和氧合能力；最后，本發(fā)明的制備方法簡 單，原材料容易獲得且經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，適合在一般的實(shí)驗(yàn)室或醫(yī)院推廣應(yīng)用。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 本發(fā)明提供了一種用于移植供肺灌流的肺灌流液，由純化水、右旋糖巧、氯化鋼、 氯化鐘、硫酸儀、無水憐酸氨二鋼、憐酸二氨鐘、葡萄糖、氯化巧、白蛋白、硝酸甘油、甲強(qiáng)龍、 肝素鋼、頭抱挫嘟鋼及緩沖劑配置而成。
[0023] 下面通過具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)和具體的介紹，W使更好的理解本發(fā)明， 但是下述實(shí)施例并不限制本發(fā)明范圍。
[0024] 具體實(shí)施例包括制備實(shí)施例和驗(yàn)證實(shí)施例，采用的實(shí)驗(yàn)儀器和試劑如下所示：
[00巧]純水機(jī)(Millipore,德國）；電子分析天平（Sartorius，德國）；體外循環(huán)機(jī)(Josha H20，Maquet，德國）；麻醉機(jī)（Detax Ohmeda，美國）；呼吸機(jī)（Detax Ohmeda， Generalelectric，美國）真空累（SHZ-D(虹）型，上海）；一次性無菌過濾器（MF75,美國 nalgene)。
[00%]右旋糖巧-20、氯化鋼、氯化鐘、硫酸儀、憐酸氨二鋼(無水）、憐酸二氨鐘、葡萄糖， (購自上海凌峰化學(xué)試劑有限公司）。
[0027] Tris-HCl緩沖劑(購自 sigma公司），牛血清白蛋白（A化umin from bovine serum， BSA，sigma)。
[0028] 硝酸甘油注射液(北京益民藥業(yè)有限公司），甲潑尼龍班巧酸鋼(輝瑞制藥），肝素 鋼注射液（上海第一生化藥業(yè)有限公司），注射用頭抱挫嘟鋼（珠海聯(lián)邦制藥股份有限公 司）。
[0029] 實(shí)施例一肺灌流液的制備
[0030] 采用下述步驟制備用于移植供肺灌流的肺灌流液
[0031] 步驟1，基本液的配制
[0032] 取50g右旋糖酢加熱溶于純化水中，依次加入8g氯化鋼、0.?氯化鐘、0.09?硫酸 儀、0.046g無水憐酸氨二鋼、0.063g憐酸二氨鐘和0.9g葡萄糖，使用Tris-肥1緩沖劑調(diào)抑至 7.5，使用孔徑為0.22皿的細(xì)菌濾器過濾，補(bǔ)入純化水定容至1000ml，得到基本液；
[0033] 步驟2,預(yù)灌流液的配制
[0034] 向步驟1中得到的基本液中依次加入0.06g氯化巧、50g白蛋白及2mg硝酸甘油，使 用Tr is-HCl緩沖劑調(diào)抑至7.4-7.6，使用孔徑為0.22皿的細(xì)菌濾器過濾，得到預(yù)灌流液；
[0035] 步驟3,制備肺灌流液
[0036] 向步驟2中得到的預(yù)灌流液加入250m巧強(qiáng)龍、5000U肝素鋼及0.5g頭抱挫嘟鋼得 到用于移植供肺灌流的肺灌流液。
[0037] 實(shí)施例二本發(fā)明的肺灌流液的豬肺灌流實(shí)驗(yàn)
[0038] 獲取豬的供肺，氣管插管并連接到呼吸機(jī)。肺動(dòng)脈和左屯、耳直接插管并連接到灌 注回路。兩根灌注管先放平，倒出里面的液體，然后看測壓管是否充滿液體，可W流入粗的 灌注管內(nèi)，此時(shí)打開Ξ接頭管與大氣相同，調(diào)零后再開始加入灌流液，開始灌注，灌注使用 實(shí)施例一制備得到的肺灌流液。
[0039] 剛開始循環(huán)溫度為12-13Γ，當(dāng)灌注液的溫度達(dá)到32°C，進(jìn)行呼吸機(jī)通氣，氧濃度 為0.21 %，W7ml潮氣量/公斤開始，7次呼吸/分鐘和5cmH20 PEEP頻率，肺的灌注液的脫氧 將用氮?dú)?86%)，二氧化碳(8%)，和氧的氣體混合物中開始(6%)dI:E(吸/呼比）=1:2。每 小時(shí)做一次血?dú)夂鸵淮畏瓮?，間隔30分鐘。做血?dú)馇?分鐘：即55分時(shí)把呼吸機(jī)設(shè)置為潮 氣量TV 7一 10ml/kg，P邸P 5，RR(呼吸頻率)7一 10,氧濃度從21%升逐漸到100%。做完血?dú)?后把氧濃度調(diào)回21%。測定肺動(dòng)脈氧分壓、左房氧分壓、計(jì)算肺動(dòng)靜脈氧分壓差，測定肺動(dòng) 脈壓和左房壓，計(jì)算肺循環(huán)阻力。
[0040] 本實(shí)施例中，利用本發(fā)明的肺灌流液灌流豬離體供肺，使用3個(gè)不同的豬離體供肺 共進(jìn)行了 3次重復(fù)試驗(yàn)，均采用如實(shí)施例一制備的肺灌流液，均同時(shí)進(jìn)行肺循環(huán)阻力和肺動(dòng) 靜脈的氧分壓差測定，結(jié)果如下表所示：
[0041 ]表1 Ξ次灌流實(shí)驗(yàn)中肺循環(huán)阻力和肺動(dòng)靜脈的氧分壓差測定
[0042]
[0043] 由上表可W看出，使用本發(fā)明的肺灌流液進(jìn)行灌流，不但灌流時(shí)間可W維持較長， 同時(shí)肺循環(huán)阻力和肺動(dòng)靜脈氧分壓差均能達(dá)到預(yù)期效果。
[0044] 本發(fā)明提供的用于移植供肺灌流的肺灌流液，首先可W提供良好的肺保護(hù)和復(fù)蘇 作用，能夠滿足移植供肺的灌流和保存需要;其次灌流時(shí)間較長，在經(jīng)本發(fā)明的肺灌流液6 小時(shí)灌流后的供肺仍然能夠保有良好的肺順應(yīng)性和氧合能力；最后，本發(fā)明的制備方法簡 單，原材料容易獲得且經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，適合在一般的實(shí)驗(yàn)室或醫(yī)院推廣應(yīng)用。
[0045] W上對本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)描述，但其只是作為范例，本發(fā)明并不限 制于W上描述的具體實(shí)施例。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對本發(fā)明進(jìn)行的等同修改和 替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和 修改，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于移植供肺灌流的肺灌流液，其特征在于，所述肺灌流液由純化水、右旋糖苷 20、氯化鈉、氯化鉀、硫酸鎂、無水磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、葡萄糖、氯化鈣、白蛋白、硝酸甘 油、甲強(qiáng)龍、肝素鈉、頭孢唑啉鈉及緩沖劑配置而成。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于移植供肺灌流的肺灌流液，其特征在于，所述肺灌流 液的配制中，以IL純化水作為溶劑計(jì)，內(nèi)含有40-60g右旋糖苷20、6-10g氯化鈉、0.2-0.6g氯 化鉀、0 · 09-0 · Ig硫酸鎂、0 ·04-0 · 05g無水磷酸氫二鈉、0 · 06-0 · 07g磷酸二氫鉀、0 · 8-0 · 9g葡 萄糖、0 · 05-0 · 07g氯化鈣、30-60g白蛋白、l-4mg硝酸甘油、200-300mg甲強(qiáng)龍、4000-6000U肝 素鈉及0.4-0.6g頭孢唑啉鈉，并使用Tris-HCl緩沖劑調(diào)節(jié)pH至7.4-7.6。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于移植供肺灌流的肺灌流液，其特征在于，所述肺灌流 液的配制中，以IL純化水作為溶劑計(jì)，內(nèi)含有50g右旋糖苷20、8g氯化鈉、0.4g氯化鉀、 0 · 098g硫酸鎂、0 · 046g無水磷酸氫二鈉、0 · 063g磷酸二氫鉀、0 · 9g葡萄糖、0 · 06g氯化H50g 白蛋白、2mg硝酸甘油、250mg甲強(qiáng)龍、5000u肝素鈉及0 · 5g頭孢唑啉鈉，使用Tr i s-HCl緩沖劑 調(diào)節(jié)pH至7.5。4. 如權(quán)利要求1所述的用于移植供肺灌流的肺灌流液的制備方法，其特征在于，包括以 下步驟： 步驟1，基本液的配制 取右旋糖酐加熱溶于純化水中，依次加入氯化鈉、氯化鉀、硫酸鎂、無水磷酸氫二鈉、磷 酸二氫鉀和葡萄糖，使用Tris-HCl緩沖劑調(diào)pH至7.4-7.6，使用細(xì)菌濾器過濾，補(bǔ)入純化水 定容，得到基本液； 步驟2,預(yù)灌流液的配制 向步驟1中得到的基本液中依次加入氯化鈣、白蛋白及硝酸甘油，使用Tris-HCl緩沖劑 調(diào)pH至7.4-7.6，使用細(xì)菌濾器過濾，得到預(yù)灌流液； 步驟3,制備肺灌流液 向步驟2中得到的預(yù)灌流液加入甲強(qiáng)龍、肝素鈉及頭孢唑啉鈉得到用于移植供肺灌流 的肺灌流液。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟1中基本液的配制為取50g右 旋糖酐20加熱溶于純化水中，依次加入8g氯化鈉、0.4g氯化鉀、0.098g硫酸鎂、0.046g無水 磷酸氫二鈉、〇. 〇63g磷酸二氫鉀和0.9g葡萄糖，使用Tris-HCl緩沖劑調(diào)pH至7.4-7.6，使用 細(xì)菌濾器過濾，補(bǔ)入純化水定容至1000ml，得到基本液。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2中預(yù)灌流液的配制為向所 述步驟1中得到的基本液中依次加入〇.〇68氯化|丐、5(^白蛋白及211^硝酸甘油，使用1'1^-HCl緩沖劑調(diào)pH至7.4-7.6，使用細(xì)菌濾器過濾，得到預(yù)灌流液。7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟3中制備肺灌流液為向所述 步驟2中得到的預(yù)灌流液加入250mg甲強(qiáng)龍、5000u肝素鈉及0.5g頭孢唑啉鈉得到用于移植 供肺灌流的肺灌流液。8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述細(xì)菌濾器的孔徑為0.22um。
【文檔編號(hào)】A01N1/02GK105918308SQ201610277886
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年4月28日
【發(fā)明人】潘雁, 吳東進(jìn), 趙珩, 李欣, 葉波, 孫益峰, 顧暢
【申請人】上海市胸科醫(yī)院