豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，包括外植體選擇與消毒、從生芽誘導(dǎo)、叢生芽增殖、生根培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和苗床培養(yǎng)等步驟。與豬血木傳統(tǒng)育苗方法相比，本發(fā)明的方法不采用豬血木種子，而是利用豬血木當(dāng)年生新梢育苗，其所需植株原料少，可短時(shí)大量繁殖，品種遺傳變異小，幼苗品質(zhì)好，幼苗成活率高達(dá)90％，移栽苗成活率高達(dá)80％，且移栽后，苗木長(zhǎng)勢(shì)好，無“小老頭苗”現(xiàn)象產(chǎn)生，有效解決了豬血木野生資源日益減少，種群自然更新困難的問題，為豬血木這一珍稀瀕危植物的有效保護(hù)提供了技術(shù)支持。
【專利說明】
豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于植物繁殖技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 豬血木化uryoden化on excelsum H.T.Qiang)屬于山茶科（Theaceae)豬血木屬多 年生木本植物，為我國(guó)特有單型屬的珍稀溯危植物，已被列為國(guó)家二級(jí)保護(hù)植物。豬血木的 系統(tǒng)學(xué)位置特殊，是研究山茶科系統(tǒng)發(fā)育和形態(tài)演化的重要材料，同時(shí)，其樹干挺直，屯、材 美觀，木材極其堅(jiān)硬，是優(yōu)良的建筑用材和家具用材，具有一定的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。目前，豬血木僅 分布于廣東省陽春縣八甲鎮(zhèn)地區(qū)，且僅殘存一個(gè)居群，居群內(nèi)個(gè)體數(shù)量?jī)H100余株，其生長(zhǎng) 環(huán)境受人為干擾影響嚴(yán)重，自然種群面臨滅絕的危險(xiǎn)。
[0003] 豬血木在自然狀況下W有性繁殖為唯一繁殖方式，但其種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)受環(huán) 境影響嚴(yán)重，種群自然更新困難。通過人工繁育幼苗擴(kuò)大種群數(shù)量并進(jìn)行物種種群回歸自 然是對(duì)溯危物種進(jìn)行有效保護(hù)的重要途徑，但傳統(tǒng)的播種育苗方法對(duì)種子需要量大，嚴(yán)重 制約豬血木運(yùn)一珍稀溯危物種的保護(hù)和大量繁殖，且傳統(tǒng)育苗方法幼苗死亡率高達(dá)80% W 上，生長(zhǎng)極其緩慢或停止生長(zhǎng)的"小老頭苗"現(xiàn)象嚴(yán)重。組織培養(yǎng)是一種植株快速繁殖技術(shù)， 其所需植株原材料少，不受生長(zhǎng)季節(jié)限制，培養(yǎng)周期短，變異低，可保持母本的優(yōu)良遺傳特 性，可用于捶救溯危植物，解決其無法短時(shí)大量繁殖的難題。但目前關(guān)于豬血木的組織培養(yǎng) 研究還未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述問題和/或缺陷，并提供至少后面將說明的優(yōu) 點(diǎn)。
[0005] 本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，利用豬血木當(dāng)年 生新梢進(jìn)行組織培養(yǎng)，獲得豬血木幼苗，并將幼苗移栽到苗床中繼續(xù)培養(yǎng)獲得豬血木移栽 苗，該繁育方法可有效提高豬血木的繁育系數(shù)，保留豬血木的優(yōu)良遺傳特性，幼苗成活率高 達(dá)90 %，移栽苗成活率高達(dá)80 %，且移栽后，苗木長(zhǎng)勢(shì)好，無"小老頭苗"現(xiàn)象產(chǎn)生，解決了豬 血木野生資源日益減少，種群自然更新困難的問題，有利于豬血木運(yùn)一珍稀溯危植物的有 效保護(hù)。
[0006] 本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，包括W下步驟：
[0007] A、剪取豬血木當(dāng)年生新梢，取其頂端5-lOcm的枝條，將所述枝條用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2% 的洗潔精水溶液浸泡20min，取出，用線狀自來水沖洗15-20min，再放入天然消毒液中浸泡 30min，最后將所述枝條用無菌水沖洗3-5次并用消毒濾紙除去其表面水分，得外植體，其 中，
[000引所述天然消毒液的制備方法為:將10-12重量份大蒜、7-9重量份巧樣草、6-8重量 份代代、6-8重量份白千層、5-7重量份藍(lán)按和3-5重量份下香粉碎至50-100目，加入500重量 份的水室溫下浸泡化，再于60°C下真空回流提取2-4h，過濾，所得濾液即為所述天然消毒 液；
[0009] B、將步驟A中得到的所述外植體用無菌解剖刀切割成0.5-0.8cm的小段并轉(zhuǎn)接到 叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于22-26Γ，黑暗條件下培養(yǎng)2天后，轉(zhuǎn)入第一光照條件下培養(yǎng)28-30 天，得第一叢生芽，其中，
[0010] 所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是WMS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括3.0-4. Omg/L ZT(玉 米素），1.0-1.5mg/L 6-KT(激動(dòng)素），1.5-2. Omg/L 2.4.5-T(2.4.5-Ξ氯苯氧乙酸），3-5g/L 大豆膚，30g/L薦糖和5g/L瓊脂，pH值為5.5-5.8;
[0011] 第一光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度為15001UX，光照時(shí)間為8-lOh/天；
[0012] C、將步驟B中得到的所述第一叢生芽用無菌解剖刀切割成帶有1-2個(gè)芽的小塊并 分別轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，于22-26Γ，黑暗條件下培養(yǎng)2天后，轉(zhuǎn)入第二光照條件下培養(yǎng) 28-30天，得第二叢生芽，其中，
[0013] 所述增殖培養(yǎng)基是^15培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括3.0-3.5111肖/121'，1.0- 1.5mg/L 6-KT，1.0-1.5mg/L ΝΑΑ(α-糞乙酸），4-6g/L大豆膚，30g/L薦糖和8g/L瓊脂，pH值 為5.5-5.8;
[0014]第二光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度1800-20001UX，光照時(shí)間為10-1化/天；
[0015] D、將步驟C中得到的所述第二叢生芽轉(zhuǎn)接到生根養(yǎng)基中，于26-28°C，黑暗條件下 培養(yǎng)6天后，轉(zhuǎn)入第Ξ光照條件下培養(yǎng)18-20天，得完整植株，其中，
[0016] 所述生根培養(yǎng)基是^3/415培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括1.0-1.5111肖/1酷4,0.5- 1. Omg/L IBA(嗎隙下酸），35g/L薦糖和lOg/L瓊脂，pH值為5.5-5.8;
[0017]第Ξ光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度2000-22001UX，光照時(shí)間化0-1化/天；
[0018] E、向所述生根培養(yǎng)基中加入0.5cm厚的無菌水，敞口培養(yǎng)7天后，將所述完整植株 取出，轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中，第四光照條件下培養(yǎng)28-30天，得幼苗，其中，
[0019] 所述壯苗培養(yǎng)基是^15培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括1.0-1.5111肖/1歴4，1.0- 1.5mg/L ZT，0.5-1. Omg/L多效挫，3-5g/L活性炭，30g/L薦糖和lOg/L瓊脂，pH值為5.5-5.8;
[0020] 第四光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度2000-22001UX，光照時(shí)間為10-1化/天，光照時(shí) 培養(yǎng)溫度為22-26Γ，非光照時(shí)培養(yǎng)溫度為16-20°C ;
[0021] F、將步驟E中得到的所述幼苗移栽到苗床中繼續(xù)培養(yǎng)5-6個(gè)月，得豬血木移栽苗， 最后將所述豬血木移栽苗進(jìn)行野外移栽。
[0022] 優(yōu)選的是，所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，苗床中培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)溫度為34- 37 °C、濕度為70-80 %、陰蔽度為60-80 %。
[0023] 優(yōu)選的是，所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，所述苗床由床體和基質(zhì)組成，其 中，所述床體，其包括：
[0024] 床架，其為上表面開口的中空長(zhǎng)方體，其長(zhǎng)為3-9m、寬為1-1.8111、高為15-20(3111;所 述床架的平行于長(zhǎng)度方向的右側(cè)面和與其相鄰的前側(cè)面、后側(cè)面及底面可拆卸連接;所述 右側(cè)面的下方設(shè)有與豎直方向呈30-60°的向下傾斜的滑槽，所述滑槽與所述底面邊緣固定 連接；
[0025] 噴霧裝置，其包括間隔設(shè)置在所述床架的內(nèi)部上方并與所述床架的長(zhǎng)度方向平行 的多個(gè)進(jìn)水管和間隔設(shè)置在所述進(jìn)水管上的多個(gè)旋轉(zhuǎn)噴頭；
[0026] 溫控裝置，其為設(shè)置在所述床架的內(nèi)部下方的呈波浪形排列的熱交換管；
[0027] 自動(dòng)控制系統(tǒng)，其包括設(shè)置在所述床架的內(nèi)部的多個(gè)溫濕度傳感器和設(shè)置在所述 前側(cè)面的外表面上的控制面板。
[0028] 優(yōu)選的是，所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，所述基質(zhì)，其包括：
[0029] 第一基質(zhì)層，其由15-20重量份稻殼、10-12重量份銀末、5-8重量份草木灰和5-8重 量份珍珠巖經(jīng)高溫滅菌制得，其厚度為6-8cm;
[0030] 第二基質(zhì)層，其位于所述第一基質(zhì)層上方，其由20-25重量份黃壤±、15-20重量份 廢蜜液、10-15重量份豆渣、10-15重量份賴桿、5-10重量份腐肥和0.3-0.5份酵素菌經(jīng)發(fā)酵 制得，其厚度為8-lOcm;
[0031] 第Ξ基質(zhì)層，其位于所述第二基質(zhì)層上方，其為厚度為l-2cm的表層腐殖±。
[0032] 優(yōu)選的是，所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中ZT濃 度為3.5mg/L，6-KT濃度為1.2mg/L，2.4.5-T濃度為1.5mg/L，大豆膚濃度為4g/L，pH值為 5.8;
[0033] 優(yōu)選的是，所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，所述增殖培養(yǎng)基中ZT濃度為 3.2mg/L，6-KT濃度為1.2mg/L，NAA濃度為1.2mg/L，大豆膚濃度為5/L，pH值為5.8;
[0034] 優(yōu)選的是，所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，所述生根培養(yǎng)基中NAA濃度為 1.2mg/L，IBA 濃度為 0.8mg/L，抑值為5.8。
[0035] 優(yōu)選的是，所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，所述壯苗培養(yǎng)基中NAA濃度為 1.2mg/L，ZT濃度為1.2mg/L，多效挫濃度為0.8mg/L，活性炭濃度為4g/L，pH值為5.8。
[0036] 本發(fā)明至少包括W下有益效果：
[0037] 第一、與豬血木傳統(tǒng)育苗方法相比，本發(fā)明的方法不采用豬血木種子，而是利用豬 血木當(dāng)年生新梢育苗，其所需植株原料少，可短時(shí)大量繁殖，品種遺傳變異小，幼苗品質(zhì)好， 幼苗成活率高達(dá)90 %，移栽苗成活率高達(dá)80 %，且移栽后，苗木長(zhǎng)勢(shì)好，無"小老頭苗"現(xiàn)象 產(chǎn)生，有效解決了豬血木野生資源日益減少，種群自然更新困難的問題，為豬血木運(yùn)一珍稀 溯危植物的有效保護(hù)提供了技術(shù)支持；
[0038] 第二、利用天然消毒液對(duì)外植體進(jìn)行消毒，可避免傳統(tǒng)的酒精和升隸消毒法對(duì)外 植體的損害，降低組織培養(yǎng)過程中產(chǎn)生崎形苗的概率；
[0039] 第Ξ、通過將ΖΤ、6-ΚΤ和大豆膚W適宜比例加入MS培養(yǎng)基中制備叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng) 基，ZT和6-KT組合，可刺激豬血木外植體內(nèi)酶的活性，促進(jìn)豬血木細(xì)胞的分裂和分化，大豆 膚中的小分子膚、游離氨基酸、糖類和無機(jī)鹽等成分進(jìn)一步促進(jìn)了豬血木細(xì)胞的生長(zhǎng)、繁 殖，培養(yǎng)28-30天即可得到健壯的第一叢生芽；
[0040] 第四、通過將ZT、6-KT、NAA和大豆膚W適宜的比例加入MS培養(yǎng)基中制備增殖培養(yǎng) 基，可顯著提高第一叢生芽的增殖效果，增殖系數(shù)高，平均增殖系數(shù)達(dá)4.9;
[0041 ] 第五、通過將NAA和IBA W適宜的比例加入3/4MS培養(yǎng)基中制備生根培養(yǎng)基，可刺激 第二叢生芽基部的細(xì)胞分裂，誘導(dǎo)生根，生根率高達(dá)98%，且根系發(fā)達(dá)；
[0042] 第六、通過將NAA、ZT、多效挫和活性炭W適宜的比例加入MS培養(yǎng)基中制備壯苗培 養(yǎng)基，ΝΑΑ,ΖΤ和多效挫可有效促進(jìn)植株根系和莖葉的生長(zhǎng)或伸展，活性炭的加入，可使生長(zhǎng) 調(diào)節(jié)劑ΝΑΑ、ΖΤ和多效挫在壯苗培養(yǎng)過程中緩慢釋放，使植株在壯苗培養(yǎng)期內(nèi)均健壯生長(zhǎng)；
[0043] 第屯、通過床體自動(dòng)控制系統(tǒng)將苗床的溫度和濕度控制在適宜范圍，可避免傳統(tǒng) 大棚培養(yǎng)中溫濕度控制不均的問題，提高幼苗的成活率，避免"小老頭苗"的產(chǎn)生；
[0044] 第八、根據(jù)豬血木幼苗的生長(zhǎng)特點(diǎn)和營(yíng)養(yǎng)需要配制專用的培養(yǎng)基質(zhì)，基質(zhì)中的第 一基質(zhì)層由稻殼、銀末、草木灰和珍珠巖經(jīng)殺菌制得，其疏松通氣，吸水保水且不含病原菌； 第二基質(zhì)層由黃壤±、廢蜜液、豆渣、賴桿、腐肥和酵素菌經(jīng)發(fā)酵制得，其可為幼苗生長(zhǎng)提供 豐富的易于吸收的營(yíng)養(yǎng)，發(fā)酵還可使第二基質(zhì)層中產(chǎn)生大量的有益細(xì)菌，可增強(qiáng)幼苗的抗 病蟲害能力；第Ξ基質(zhì)層為表層腐殖±，可為幼苗生長(zhǎng)提供一定營(yíng)養(yǎng)并減緩第二基質(zhì)層中 養(yǎng)分和水分的散失，確保幼苗在其上長(zhǎng)勢(shì)好，無病蟲害，所得移栽苗健壯，將其進(jìn)行野外移 栽后，成活率高，長(zhǎng)勢(shì)好。
[0045] 本發(fā)明的其他優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征將部分通過下面的說明體現(xiàn)，部分還將通過對(duì)本 發(fā)明的研究和實(shí)踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。
【附圖說明】
[0046] 圖1為本發(fā)明床體的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0047] 其中，1、床架；11、右側(cè)面;12、前側(cè)面;13、后側(cè)面;14、底面;15、滑槽;2、進(jìn)水管;3、 旋轉(zhuǎn)噴頭;4、熱交換管;5、溫濕度傳感器;6、控制面板。
【具體實(shí)施方式】
[0048] 下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，W令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照 說明書文字能夠據(jù)W實(shí)施。
[0049] 需要說明的是，下述實(shí)施例中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法，所述 試劑和材料，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得；在本發(fā)明的描述中，術(shù)語"橫向"、"縱 陸'、''上"、'下'、''前"、''后'、''左"、''右'、''豎直"、'冰平"、"頂'、''底'、''內(nèi)"、''外"等指示的方 位或位置關(guān)系為基于附圖所示的方位或位置關(guān)系，僅是為了便于描述本發(fā)明和簡(jiǎn)化描述， 并不是指示或暗示所指的裝置或元件必須具有特定的方位、W特定的方位構(gòu)造和操作，因 此不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。
[(K)加]實(shí)施例1:
[0051] -種豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，包括W下步驟：
[0052] A、剪取豬血木當(dāng)年生新梢，取其頂端5cm的枝條，將所述枝條用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的 洗潔精水溶液浸泡20min，取出，用線狀自來水沖洗15min，再放入天然消毒液中浸泡30min， 最后將所述枝條用無菌水沖洗3次并用消毒濾紙除去其表面水分，得外植體，其中，
[0053] 所述天然消毒液的制備方法為:將10重量份大蒜、7重量份巧樣草、6重量份代代、6 重量份白千層、5重量份藍(lán)按和3重量份下香粉碎至50目，加入500重量份的水室溫下浸泡 化，再于6〇°C下真空回流提取化，過濾，所得濾液即為所述天然消毒液；
[0054] B、將步驟A中得到的所述外植體用無菌解剖刀切割成0.5cm的小段并轉(zhuǎn)接到叢生 芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于22Γ，黑暗條件下培養(yǎng)2天后，轉(zhuǎn)入第一光照條件下培養(yǎng)28天，得第一叢 生芽，其中，
[0化日]所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是WMS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括3.0mg/L ZT，1.0mg/L 6-ΚΤ，1.5mg/L 2.4.5-Τ，3g/L大豆膚，30g/L薦糖和5g/L瓊脂，pH值為5.5;
[0056]第一光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度為15001UX，光照時(shí)間為化/天；
[0057] C、將步驟B中得到的所述第一叢生芽用無菌解剖刀切割成帶有1個(gè)芽的小塊并分 別轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，于22Γ，黑暗條件下培養(yǎng)2天后，轉(zhuǎn)入第二光照條件下培養(yǎng)28天，得 第二叢生芽，其中，
[0化引所述增殖培養(yǎng)基是WMS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括3.0mg/L ZT，1.0mg/L 6-KT， 1. Omg/L NAA，4g/L大豆膚，30g/L薦糖和8g/L瓊脂，pH值為5.5;
[0059] 第二光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度18001UX，光照時(shí)間為lOh/天；
[0060] D、將步驟C中得到的所述第二叢生芽轉(zhuǎn)接到生根養(yǎng)基中，于26Γ，黑暗條件下培養(yǎng) 6天后，轉(zhuǎn)入第Ξ光照條件下培養(yǎng)18天，得完整植株，其中，
[0061 ] 所述生根培養(yǎng)基是W3/4MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括l.Omg/L NAA，0.5mg/L IBA，35g/L薦糖和lOg/L瓊脂，pH值為5.5;
[0062] 第Ξ光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度20001UX，光照時(shí)間為lOh/天；
[0063] E、向所述生根培養(yǎng)基中加入0.5cm厚的無菌水，敞口培養(yǎng)7天后，將所述完整植株 取出，轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中，第四光照條件下培養(yǎng)28天，得幼苗，其中，
[0064] 所述壯苗培養(yǎng)基是WMS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括l.Omg/L NAA，1.0mg/L ZT， 0.5mg/L多效挫，3g/L活性炭，30g/L薦糖和lOg/L瓊脂，pH值為5.5;
[0065] 第四光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度20001UX，光照時(shí)間為lOh/天，光照時(shí)培養(yǎng)溫度 為22°C，非光照時(shí)培養(yǎng)溫度為16°C ;
[0066] F、將步驟E中得到的所述幼苗移栽到苗床中繼續(xù)培養(yǎng)5個(gè)月，得豬血木移栽苗，最 后將所述豬血木移栽苗進(jìn)行野外移栽。
[0067] 所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，苗床中培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)溫度為34°C、濕度為 70 %、陰蔽度為60 %。
[0068] 所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，所述苗床由床體和基質(zhì)組成，其中，所述床 體如圖1所示，其包括：
[0069] 床架1，其為上表面開口的中空長(zhǎng)方體，其長(zhǎng)為3m、寬為Im、高為15cm;所述床架1的 平行于長(zhǎng)度方向的右側(cè)面11和與其相鄰的前側(cè)面12、后側(cè)面13及底面14可拆卸連接;所述 右側(cè)面11的下方設(shè)有與豎直方向呈60°的向下傾斜的滑槽15,所述滑槽15與所述底面14邊 緣固定連接;噴霧裝置，其包括間隔設(shè)置在所述床架的內(nèi)部上方并與所述床架的長(zhǎng)度方向 平行的多個(gè)進(jìn)水管2和間隔設(shè)置在所述進(jìn)水管上的多個(gè)旋轉(zhuǎn)噴頭3;溫控裝置，其為設(shè)置在 所述床架的內(nèi)部下方的呈波浪形排列的熱交換管4;自動(dòng)控制系統(tǒng)，其包括設(shè)置在所述床架 的內(nèi)部的多個(gè)溫濕度傳感器5和設(shè)置在所述前側(cè)面的外表面上的控制面板6。
[0070] 所述床架自動(dòng)控溫控濕的工作原理為，溫濕度傳感器將采集到的溫濕度信息傳遞 給控制面板，控制面板通過比對(duì)程序與設(shè)定值進(jìn)行對(duì)比，當(dāng)測(cè)定值與設(shè)定值不相等時(shí)，控制 面板則通過控制程序控制熱交換管和噴霧裝置工作，直至測(cè)定值與設(shè)定值相等時(shí)，控制面 板則通過控制程序控制熱交換管和噴霧裝置停止工作。
[0071 ]所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，所述基質(zhì)，其包括：
[0072] 第一基質(zhì)層，其由15重量份稻殼、10重量份銀末、5重量份草木灰和5重量份珍珠巖 經(jīng)高溫滅菌制得，其厚度為6cm;
[0073] 第二基質(zhì)層，其位于所述第一基質(zhì)層上方，其由20重量份黃壤±、15重量份廢蜜 液、10重量份豆渣、10重量份賴桿、5重量份腐肥和0.3份酵素菌經(jīng)發(fā)酵制得，其厚度為8cm;
[0074] 第Ξ基質(zhì)層，其位于所述第二基質(zhì)層上方，其為厚度為1cm的表層腐殖±。
[0075] 實(shí)施例2:
[0076] -種豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，包括W下步驟：
[0077] A、剪取豬血木當(dāng)年生新梢，取其頂端8cm的枝條，將所述枝條用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的 洗潔精水溶液浸泡20min，取出，用線狀自來水沖洗18min，再放入天然消毒液中浸泡30min， 最后將所述枝條用無菌水沖洗4次并用消毒濾紙除去其表面水分，得外植體，其中，
[0078] 所述天然消毒液的制備方法為:將11重量份大蒜、8重量份巧樣草、7重量份代代、7 重量份白千層、6重量份藍(lán)按和4重量份下香粉碎至80目，加入500重量份的水室溫下浸泡 化，再于6〇°C下真空回流提取化，過濾，所得濾液即為所述天然消毒液；
[0079] B、將步驟A中得到的所述外植體用無菌解剖刀切割成0.6cm的小段并轉(zhuǎn)接到叢生 芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于24Γ，黑暗條件下培養(yǎng)2天后，轉(zhuǎn)入第一光照條件下培養(yǎng)29天，得第一叢 生芽，其中，
[0080] 所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是WMS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括3.5mg/L ZT，1.2mg/L 6-ΚΤ，1.5mg/L 2.4.5-Τ，4g/L大豆膚，30g/L薦糖和5g/L瓊脂，pH值為5.8;
[0081] 第一光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度為15001ux，光照時(shí)間為化/天；
[0082] C、將步驟B中得到的所述第一叢生芽用無菌解剖刀切割成帶有2個(gè)芽的小塊并分 別轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，于24Γ，黑暗條件下培養(yǎng)2天后，轉(zhuǎn)入第二光照條件下培養(yǎng)29天，得 第二叢生芽，其中，
[0083] 所述增殖培養(yǎng)基是WMS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括3.2mg/L ZT，1.2mg/L 6-KT， 1.2mg/L NAA，5g/L大豆膚，30g/L薦糖和8g/L瓊脂，pH值為5.8;
[0084] 第二光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度20001ux，光照時(shí)間為Uh/天；
[0085] D、將步驟C中得到的所述第二叢生芽轉(zhuǎn)接到生根養(yǎng)基中，于27Γ，黑暗條件下培養(yǎng) 6天后，轉(zhuǎn)入第Ξ光照條件下培養(yǎng)19天，得完整植株，其中，
[0086] 所述生根培養(yǎng)基是W3/4MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括1.2mg/L NAA，0.8mg/L IBA，35g/L薦糖和lOg/L瓊脂，pH值為5.8;
[0087] 第Ξ光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度21001UX，光照時(shí)間為1化/天；
[0088] Ε、向所述生根培養(yǎng)基中加入0.5cm厚的無菌水，敞口培養(yǎng)7天后，將所述完整植株 取出，轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中，第四光照條件下培養(yǎng)29天，得幼苗，其中，
[0089] 所述壯苗培養(yǎng)基是WMS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括1.2mg/L NAA，1.2mg/L ZT， 0.8mg/L多效挫，4g/L活性炭，30g/L薦糖和lOg/L瓊脂，pH值為5.8;
[0090] 第四光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度21001UX，光照時(shí)間為llh/天，光照時(shí)培養(yǎng)溫度 為24°C，非光照時(shí)培養(yǎng)溫度為18°C ;
[0091] F、將步驟E中得到的所述幼苗移栽到苗床中繼續(xù)培養(yǎng)5.5個(gè)月，得豬血木移栽苗， 最后將所述豬血木移栽苗進(jìn)行野外移栽。
[0092] 所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，苗床中培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)溫度為36°C、濕度為 75%、陰蔽度為70%。
[0093] 所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，所述苗床由床體和基質(zhì)組成，其中，所述床 體如圖1所示，其包括：
[0094] 床架1，其為上表面開口的中空長(zhǎng)方體，其長(zhǎng)為6m、寬為1.4m、高為18cm;所述床架1 的平行于長(zhǎng)度方向的右側(cè)面11和與其相鄰的前側(cè)面12、后側(cè)面13及底面14可拆卸連接;所 述右側(cè)面11的下方設(shè)有與豎直方向呈60°的向下傾斜的滑槽15,所述滑槽15與所述底面14 邊緣固定連接;噴霧裝置，其包括間隔設(shè)置在所述床架的內(nèi)部上方并與所述床架的長(zhǎng)度方 向平行的多個(gè)進(jìn)水管2和間隔設(shè)置在所述進(jìn)水管上的多個(gè)旋轉(zhuǎn)噴頭3;溫控裝置，其為設(shè)置 在所述床架的內(nèi)部下方的呈波浪形排列的熱交換管4;自動(dòng)控制系統(tǒng)，其包括設(shè)置在所述床 架的內(nèi)部的多個(gè)溫濕度傳感器5和設(shè)置在所述前側(cè)面的外表面上的控制面板6。
[00M]所述床架自動(dòng)控溫控濕的工作原理為，溫濕度傳感器將采集到的溫濕度信息傳遞 給控制面板，控制面板通過比對(duì)程序與設(shè)定值進(jìn)行對(duì)比，當(dāng)測(cè)定值與設(shè)定值不相等時(shí)，控制 面板則通過控制程序控制熱交換管和噴霧裝置工作，直至測(cè)定值與設(shè)定值相等時(shí)，控制面 板則通過控制程序控制熱交換管和噴霧裝置停止工作。
[0096] 所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，所述基質(zhì)，其包括：
[0097] 第一基質(zhì)層，其由18重量份稻殼、11重量份銀末、6重量份草木灰和6重量份珍珠巖 經(jīng)高溫滅菌制得，其厚度為7cm;
[0098] 第二基質(zhì)層，其位于所述第一基質(zhì)層上方，其由23重量份黃壤±、17重量份廢蜜 液、12重量份豆渣、12重量份賴桿、8重量份腐肥和0.4份酵素菌經(jīng)發(fā)酵制得，其厚度為9cm;
[0099] 第Ξ基質(zhì)層，其位于所述第二基質(zhì)層上方，其為厚度為2cm的表層腐殖±。
[0100] 實(shí)施例3:
[0101] -種豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，包括W下步驟：
[0102] A、剪取豬血木當(dāng)年生新梢，取其頂端10cm的枝條，將所述枝條用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的 洗潔精水溶液浸泡20min，取出，用線狀自來水沖洗20min，再放入天然消毒液中浸泡30min， 最后將所述枝條用無菌水沖洗5次并用消毒濾紙除去其表面水分，得外植體，其中，
[0103] 所述天然消毒液的制備方法為:將12重量份大蒜、9重量份巧樣草、8重量份代代、8 重量份白千層、7重量份藍(lán)按和5重量份下香粉碎至100目，加入500重量份的水室溫下浸泡 化，再于6〇°C下真空回流提取4h，過濾，所得濾液即為所述天然消毒液；
[0104] B、將步驟A中得到的所述外植體用無菌解剖刀切割成0.8cm的小段并轉(zhuǎn)接到叢生 芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于26Γ，黑暗條件下培養(yǎng)2天后，轉(zhuǎn)入第一光照條件下培養(yǎng)30天，得第一叢 生芽，其中，
[01化]所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是WMS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括4.0mg/L ZT，1.5mg/L 6-ΚΤ，2. Omg/L 2.4.5-Τ，5g/L大豆膚，30g/L薦糖和5g/L瓊脂，pH值為5.8;
[0106] 第一光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度為15001ux，光照時(shí)間為lOh/天；
[0107] C、將步驟B中得到的所述第一叢生芽用無菌解剖刀切割成帶有2個(gè)芽的小塊并分 別轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，于26Γ，黑暗條件下培養(yǎng)2天后，轉(zhuǎn)入第二光照條件下培養(yǎng)30天，得 第二叢生芽，其中，
[0108] 所述增殖培養(yǎng)基是WMS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括3.5mg/L ZT，1.5mg/L 6-KT， 1.5mg/L NAA，6g/L大豆膚，30g/L薦糖和8g/L瓊脂，pH值為5.8;
[0109] 第二光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度20001UX，光照時(shí)間為12h/天；
[0110] D、將步驟C中得到的所述第二叢生芽轉(zhuǎn)接到生根養(yǎng)基中，于28Γ，黑暗條件下培養(yǎng) 6天后，轉(zhuǎn)入第Ξ光照條件下培養(yǎng)20天，得完整植株，其中，
[0111] 所述生根培養(yǎng)基是W3/4MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括1.5mg/L NAA，1.0mg/L IBA，35g/L薦糖和lOg/L瓊脂，pH值為5.8;
[0112] 第Ξ光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度22001UX，光照時(shí)間為12h/天；
[0113] E、向所述生根培養(yǎng)基中加入0.5cm厚的無菌水，敞口培養(yǎng)7天后，將所述完整植株 取出，轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中，第四光照條件下培養(yǎng)30天，得幼苗，其中，
[0114] 所述壯苗培養(yǎng)基是WMS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括1.5mg/L NAA，1.5mg/L ZT， 1. Omg/L多效挫，5g/L活性炭，30g/L薦糖和lOg/L瓊脂，pH值為5.8;
[0115] 第四光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度22001UX，光照時(shí)間為12h/天，光照時(shí)培養(yǎng)溫度 為26°C，非光照時(shí)培養(yǎng)溫度為20°C ;
[0116] F、將步驟E中得到的所述幼苗移栽到苗床中繼續(xù)培養(yǎng)6個(gè)月，得豬血木移栽苗，最 后將所述豬血木移栽苗進(jìn)行野外移栽。
[0117] 所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，苗床中培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)溫度為37°C、濕度為 80 %、陰蔽度為80 %。
[0118] 所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，所述苗床由床體和基質(zhì)組成，其中，所述床 體如圖1所示，其包括：
[0119] 床架1，其為上表面開口的中空長(zhǎng)方體，其長(zhǎng)為9m、寬為1.8m、高為20cm;所述床架1 的平行于長(zhǎng)度方向的右側(cè)面11和與其相鄰的前側(cè)面12、后側(cè)面13及底面14可拆卸連接;所 述右側(cè)面11的下方設(shè)有與豎直方向呈60°的向下傾斜的滑槽15,所述滑槽15與所述底面14 邊緣固定連接;噴霧裝置，其包括間隔設(shè)置在所述床架的內(nèi)部上方并與所述床架的長(zhǎng)度方 向平行的多個(gè)進(jìn)水管2和間隔設(shè)置在所述進(jìn)水管上的多個(gè)旋轉(zhuǎn)噴頭3;溫控裝置，其為設(shè)置 在所述床架的內(nèi)部下方的呈波浪形排列的熱交換管4;自動(dòng)控制系統(tǒng)，其包括設(shè)置在所述床 架的內(nèi)部的多個(gè)溫濕度傳感器5和設(shè)置在所述前側(cè)面的外表面上的控制面板6。
[0120] 所述床架自動(dòng)控溫控濕的工作原理為，溫濕度傳感器將采集到的溫濕度信息傳遞 給控制面板，控制面板通過比對(duì)程序與設(shè)定值進(jìn)行對(duì)比，當(dāng)測(cè)定值與設(shè)定值不相等時(shí)，控制 面板則通過控制程序控制熱交換管和噴霧裝置工作，直至測(cè)定值與設(shè)定值相等時(shí)，控制面 板則通過控制程序控制熱交換管和噴霧裝置停止工作。
[0121] 所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，所述基質(zhì)，其包括：
[0122] 第一基質(zhì)層，其由20重量份稻殼、12重量份銀末、8重量份草木灰和8重量份珍珠巖 經(jīng)高溫滅菌制得，其厚度為8cm;
[0123] 第二基質(zhì)層，其位于所述第一基質(zhì)層上方，其由25重量份黃壤±、20重量份廢蜜 液、15重量份豆渣、15重量份賴桿、10重量份腐肥和0.5份酵素菌經(jīng)發(fā)酵制得，其厚度為 10cm；
[0124] 第Ξ基質(zhì)層，其位于所述第二基質(zhì)層上方，其為厚度為2cm的表層腐殖±。
[0125] 實(shí)施例4:
[01%] -種豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，包括W下步驟：
[0127] A、剪取豬血木當(dāng)年生新梢，取其頂端6cm的枝條，將所述枝條用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的 洗潔精水溶液浸泡20min，取出，用線狀自來水沖洗20min，再放入天然消毒液中浸泡30min， 最后將所述枝條用無菌水沖洗5次并用消毒濾紙除去其表面水分，得外植體，其中，
[0128] 所述天然消毒液的制備方法為:將12重量份大蒜、7重量份巧樣草、6重量份代代、6 重量份白千層、5重量份藍(lán)按和5重量份下香粉碎至100目，加入500重量份的水室溫下浸泡 化，再于6〇°C下真空回流提取4h，過濾，所得濾液即為所述天然消毒液；
[0129] B、將步驟A中得到的所述外植體用無菌解剖刀切割成0.8cm的小段并轉(zhuǎn)接到叢生 芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于25Γ，黑暗條件下培養(yǎng)2天后，轉(zhuǎn)入第一光照條件下培養(yǎng)30天，得第一叢 生芽，其中，
[0130] 所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是WMS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括3.8mg/L ZT，1.4mg/L 6-ΚΤ，1.5mg/L 2.4.5-Τ，5g/L大豆膚，30g/L薦糖和5g/L瓊脂，pH值為5.6;
[0131] 第一光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度為15001ux，光照時(shí)間為lOh/天；
[0132] C、將步驟B中得到的所述第一叢生芽用無菌解剖刀切割成帶有1個(gè)芽的小塊并分 別轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，于25Γ，黑暗條件下培養(yǎng)2天后，轉(zhuǎn)入第二光照條件下培養(yǎng)30天，得 第二叢生芽，其中，
[0133] 所述增殖培養(yǎng)基是WMS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括3.5mg/L ZT，1.0mg/L 6-KT， 1.5mg/L NAA，6g/L大豆膚，30g/L薦糖和8g/L瓊脂，pH值為5.6;
[0134] 第二光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度20001UX，光照時(shí)間為12h/天；
[0135] D、將步驟C中得到的所述第二叢生芽轉(zhuǎn)接到生根養(yǎng)基中，于28Γ，黑暗條件下培養(yǎng) 6天后，轉(zhuǎn)入第Ξ光照條件下培養(yǎng)20天，得完整植株，其中，
[0136] 所述生根培養(yǎng)基是W3/4MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括1.5mg/L NAA，0.8mg/L IBA，35g/L薦糖和lOg/L瓊脂，pH值為5.6;
[0137] 第Ξ光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度20001UX，光照時(shí)間為12h/天；
[0138] E、向所述生根培養(yǎng)基中加入0.5cm厚的無菌水，敞口培養(yǎng)7天后，將所述完整植株 取出，轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中，第四光照條件下培養(yǎng)30天，得幼苗，其中，
[0139] 所述壯苗培養(yǎng)基是WMS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括1.5mg/L NAA，1.2mg/L ZT， 0.5mg/L多效挫，3g/L活性炭，30g/L薦糖和lOg/L瓊脂，pH值為5.6;
[0140] 第四光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度20001UX，光照時(shí)間為12h/天，光照時(shí)培養(yǎng)溫度 為26°C，非光照時(shí)培養(yǎng)溫度為16°C ;
[0141] F、將步驟E中得到的所述幼苗移栽到苗床中繼續(xù)培養(yǎng)6個(gè)月，得豬血木移栽苗，最 后將所述豬血木移栽苗進(jìn)行野外移栽。
[0142] 所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，苗床中培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)溫度為35°C、濕度為 80%、陰蔽度為70 %。
[0143] 所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，所述苗床由床體和基質(zhì)組成，其中，所述床 體如圖1所示，其包括：
[0144] 床架1，其為上表面開口的中空長(zhǎng)方體，其長(zhǎng)為6m、寬為1.5m、高為20cm;所述床架1 的平行于長(zhǎng)度方向的右側(cè)面11和與其相鄰的前側(cè)面12、后側(cè)面13及底面14可拆卸連接;所 述右側(cè)面11的下方設(shè)有與豎直方向呈60°的向下傾斜的滑槽15,所述滑槽15與所述底面14 邊緣固定連接;噴霧裝置，其包括間隔設(shè)置在所述床架的內(nèi)部上方并與所述床架的長(zhǎng)度方 向平行的多個(gè)進(jìn)水管2和間隔設(shè)置在所述進(jìn)水管上的多個(gè)旋轉(zhuǎn)噴頭3;溫控裝置，其為設(shè)置 在所述床架的內(nèi)部下方的呈波浪形排列的熱交換管4;自動(dòng)控制系統(tǒng)，其包括設(shè)置在所述床 架的內(nèi)部的多個(gè)溫濕度傳感器5和設(shè)置在所述前側(cè)面的外表面上的控制面板6。
[0145] 所述床架自動(dòng)控溫控濕的工作原理為，溫濕度傳感器將采集到的溫濕度信息傳遞 給控制面板，控制面板通過比對(duì)程序與設(shè)定值進(jìn)行對(duì)比，當(dāng)測(cè)定值與設(shè)定值不相等時(shí)，控制 面板則通過控制程序控制熱交換管和噴霧裝置工作，直至測(cè)定值與設(shè)定值相等時(shí)，控制面 板則通過控制程序控制熱交換管和噴霧裝置停止工作。
[0146] 所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，所述基質(zhì)，其包括：
[0147] 第一基質(zhì)層，其由20重量份稻殼、10重量份銀末、8重量份草木灰和8重量份珍珠巖 經(jīng)高溫滅菌制得，其厚度為8cm;
[0148] 第二基質(zhì)層，其位于所述第一基質(zhì)層上方，其由25重量份黃壤±、17重量份廢蜜 液、12重量份豆渣、15重量份賴桿、10重量份腐肥和0.5份酵素菌經(jīng)發(fā)酵制得，其厚度為 10cm；
[0149] 第Ξ基質(zhì)層，其位于所述第二基質(zhì)層上方，其為厚度為2cm的表層腐殖±。
[0150] 對(duì)比例1:
[0151] 通過對(duì)比例1來進(jìn)一步說明本發(fā)明天然消毒液的有益效果。其中，對(duì)照組的外植體 消毒采用傳統(tǒng)酒精和升隸消毒法，對(duì)照組的其余操作條件同實(shí)施例2,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。
[0152] 表1不同消毒方法對(duì)豬血木幼苗的影響
[0153]
~由表1可知，消毒方法對(duì)豬血木幼苗的增殖系數(shù)影響不顯著，但對(duì)崎形苗率有顯著 影響，采用天然消毒液的豬血木幼苗崎形苗率僅為0.3%，而采用酒精和升隸消毒法的豬血 木幼苗崎形率高達(dá)7%，說明天然消毒液消毒可顯著降低豬血木幼苗的崎形苗率。
[0155] 對(duì)比例2:
[0156] 通過對(duì)比例2來進(jìn)一步說明本發(fā)明苗床的有益效果。其中，對(duì)照組在所述步驟F中 幼苗培養(yǎng)時(shí)采用沙床培養(yǎng)，通過大棚控制溫度，人工加水控制濕度，對(duì)照組的其余操作條件 同實(shí)施例2，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。
[0157] 表2不同培養(yǎng)方式對(duì)豬血木幼苗的影響
[0158] _
[0159] ~由表2可知，采用苗床培養(yǎng)，豬血木幼苗的成活率、平均株高和平均葉片數(shù)均顯著 高于沙床培養(yǎng)，其中，成活率提高181.3 %，平均株高提高88.3 %，平均葉片數(shù)提高33.3 %， 說明采用本發(fā)明苗床培養(yǎng)不僅能提高豬血木幼苗的成活率，還能促進(jìn)幼苗的生長(zhǎng)。
[0160] 盡管本發(fā)明的實(shí)施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實(shí)施方式中所列 運(yùn)用。它完全可W被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域。對(duì)于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地 實(shí)現(xiàn)另外的修改。因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限 于特定的細(xì)節(jié)和運(yùn)里示出與描述的實(shí)例。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，其特征在于，包括以下步驟： A、 剪取豬血木當(dāng)年生新梢，取其頂端5-lOcm的枝條，將所述枝條用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的洗 潔精水溶液浸泡2 O m i η，取出，用線狀自來水沖洗15 - 2 O m i η，再放入天然消毒液中浸泡 30min，最后將所述枝條用無菌水沖洗3-5次并用消毒濾紙除去其表面水分，得外植體，其 中， 所述天然消毒液的制備方法為:將10-12重量份大蒜、7-9重量份檸檬草、6-8重量份代 代、6-8重量份白千層、5-7重量份藍(lán)桉和3-5重量份丁香粉碎至50-100目，加入500重量份的 水室溫下浸泡lh，再于60°C下真空回流提取2-4h，過濾，所得濾液即為所述天然消毒液； B、 將步驟A中得到的所述外植體用無菌解剖刀切割成0.5-0.8cm的小段并轉(zhuǎn)接到叢生 芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于22-26°C，黑暗條件下培養(yǎng)2天后，轉(zhuǎn)入第一光照條件下培養(yǎng)28-30天，得 第一叢生芽，其中， 所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括3.0-4. Omg/L ZT，1. Ο-? · 5mg/L 6-KT ， 1 · 5-2 · Omg/L 2 · 4 · 5-T ， 3-5g/L 大豆肽， 30g/L 蔗糖和 5g/L 瓊脂， pH 值為 5 · 5-5.8； 第一光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度為15001ux，光照時(shí)間為8-10h/天； C、 將步驟B中得到的所述第一叢生芽用無菌解剖刀切割成帶有1-2個(gè)芽的小塊并分別 轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，于22-26°C，黑暗條件下培養(yǎng)2天后，轉(zhuǎn)入第二光照條件下培養(yǎng)28-30 天，得第二叢生芽，其中， 所述增殖培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括3.0-3.5mg/L ZT，1.0-1.5mg/L 6-KT，I · 0-1 · 5mg/L NAA，4-6g/L大豆肽，30g/L蔗糖和8g/L瓊脂，pH值為5 · 5-5 · 8; 第二光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度1800-2000 lux，光照時(shí)間為10-12h/天； D、 將步驟C中得到的所述第二叢生芽轉(zhuǎn)接到生根養(yǎng)基中，于26-28Γ，黑暗條件下培養(yǎng)6 天后，轉(zhuǎn)入第三光照條件下培養(yǎng)18-20天，得完整植株，其中， 所述生根培養(yǎng)基是以3/4MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括1.0-1.511^/1^財(cái)4,0.5-1 · Omg/L IBA，35g/L蔗糖和 10g/L瓊脂，pH值為5 · 5-5 · 8; 第三光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度2000-2200 lux，光照時(shí)間為10-12h/天； E、 向所述生根培養(yǎng)基中加入0.5cm厚的無菌水，敞口培養(yǎng)7天后，將所述完整植株取出， 轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中，第四光照條件下培養(yǎng)28-30天，得幼苗，其中， 所述壯苗培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括1.0-1.5mg/L NAA，1.0-1.5mg/L ZT，0.5-1.0mg/L 多效唑，3-5g/L 活性炭，30g/L 蔗糖和 10g/L 瓊脂，pH 值為 5.5-5.8; 第四光照條件下培養(yǎng)時(shí)，光照強(qiáng)度2000-2200Iux，光照時(shí)間為10-12h/天，光照時(shí)培養(yǎng) 溫度為22-26°C，非光照時(shí)培養(yǎng)溫度為16-20°C ; F、 將步驟E中得到的所述幼苗移栽到苗床中繼續(xù)培養(yǎng)5-6個(gè)月，得豬血木移栽苗，最后 將所述豬血木移栽苗進(jìn)行野外移栽。2. 如權(quán)利要求1所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，其特征在于，苗床中培養(yǎng)時(shí)，培 養(yǎng)溫度為34-37 °C、濕度為70-80 %、陰蔽度為60-80 %。3. 如權(quán)利要求2所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，其特征在于，所述苗床由床體和 基質(zhì)組成，其中，所述床體，其包括： 床架，其為上表面開口的中空長(zhǎng)方體，其長(zhǎng)為3-9m、寬為1-1.8111、高為15-20(^;所述床 架的平行于長(zhǎng)度方向的右側(cè)面和與其相鄰的前側(cè)面、后側(cè)面及底面可拆卸連接;所述右側(cè) 面的下方設(shè)有與豎直方向呈30-60°的向下傾斜的滑槽，所述滑槽與所述底面邊緣固定連 接； 噴霧裝置，其包括間隔設(shè)置在所述床架的內(nèi)部上方并與所述床架的長(zhǎng)度方向平行的多 個(gè)進(jìn)水管和間隔設(shè)置在所述進(jìn)水管上的多個(gè)旋轉(zhuǎn)噴頭； 溫控裝置，其為設(shè)置在所述床架的內(nèi)部下方的呈波浪形排列的熱交換管； 自動(dòng)控制系統(tǒng)，其包括設(shè)置在所述床架的內(nèi)部的多個(gè)溫濕度傳感器和設(shè)置在所述前側(cè) 面的外表面上的控制面板。4. 如權(quán)利要求3所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，其特征在于，所述基質(zhì)，其包括： 第一基質(zhì)層，其由15-20重量份稻殼、10-12重量份鋸末、5-8重量份草木灰和5-8重量份 珍珠巖經(jīng)高溫滅菌制得，其厚度為6-8cm; 第二基質(zhì)層，其位于所述第一基質(zhì)層上方，其由20-25重量份黃壤土、15-20重量份廢蜜 液、10-15重量份豆渣、10-15重量份秸桿、5-10重量份廄肥和0.3-0.5份酵素菌經(jīng)發(fā)酵制得， 其厚度為8-10cm; 第三基質(zhì)層，其位于所述第二基質(zhì)層上方，其為厚度為l_2cm的表層腐殖土。5. 如權(quán)利要求1所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，其特征在于，所述叢生芽誘導(dǎo)培 養(yǎng)基中ZT濃度為3 · 5mg/L，6-KT濃度為1 · 2mg/L，2 · 4 · 5-T濃度為1 · 5mg/L，大豆肽濃度為4g/ 1^罐為5.8〇6. 如權(quán)利要求1所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，其特征在于，所述增殖培養(yǎng)基中 ZT濃度為3 · 2mg/L，6-KT濃度為1 · 2mg/L，NAA濃度為1 · 2mg/L，大豆肽濃度為5/L，pH值為5 · 8。7. 如權(quán)利要求1所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)基中 NAA 濃度為 1 · 2mg/L，IBA 濃度為 0· 8mg/L，pH 值為5 · 8。8. 如權(quán)利要求1所述的豬血木組織培養(yǎng)快速繁育方法，其特征在于，所述壯苗培養(yǎng)基中 NAA濃度為1.2mg/L，ZT濃度為1.2mg/L，多效唑濃度為0.8mg/L，活性炭濃度為4g/L，pH值為 5.8〇
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK105918133SQ201610368541
【公開日】2016年9月7日
【申請(qǐng)日】2016年5月27日
【發(fā)明人】陳思
【申請(qǐng)人】陳思