一種uva調(diào)控槲蕨柚皮苷含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明屬于植物栽培領(lǐng)域，具體設(shè)及一種調(diào)控搬藤抽皮巧含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 搬藤(化ynaria roosii)是中型附生藤類，其根狀莖W骨碎補(bǔ)入藥，并且作為骨碎 補(bǔ)的唯一正品收載于《中國(guó)藥典》中，具有補(bǔ)腎堅(jiān)骨、續(xù)傷止痛的功效。2001年中國(guó)中醫(yī)科學(xué) 院在多年臨床的基礎(chǔ)上提取搬藤中的有效成分總黃酬成功研制了中藥強(qiáng)骨膠囊，該藥填補(bǔ) 了我國(guó)治療骨質(zhì)疏松癥狀尚無(wú)中藥二類新藥的空白。目前我國(guó)對(duì)骨碎補(bǔ)藥材的需求量很 大，但搬藤原材料仍全部來(lái)源于野外資源的采挖，不僅浪費(fèi)大量的人力財(cái)力，還對(duì)生態(tài)環(huán)境 造成了不可逆的破壞，所W搬藤的人工栽培和工廠化規(guī)模生產(chǎn)亟待研究和推廣，運(yùn)也是我 國(guó)中藥現(xiàn)代化的必然趨勢(shì)。
[0003] 大量的試驗(yàn)及臨床應(yīng)用常把抽皮巧和新北美圣草巧兩種有效成分的含量作為搬 藤(骨碎補(bǔ))藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。兩者均為黃酬類化合物，抽皮巧可用于防治屯、腦血管疾病、鎮(zhèn) 痛、清熱及消炎;新北美圣草巧可用于治療骨質(zhì)疏松。由此可見，在補(bǔ)腎健骨方面，主要是新 北美圣草巧發(fā)揮顯著效用。本研究組通過對(duì)人工栽培3年生搬藤進(jìn)行品質(zhì)分析發(fā)現(xiàn):其新北 美圣草巧的含量不足0.1%，運(yùn)嚴(yán)重限制了人工栽培搬藤作為骨碎補(bǔ)藥材使用的生產(chǎn)實(shí)踐。
[0004] 已有研究表明，紫外福射對(duì)植物細(xì)胞內(nèi)黃酬類次生代謝產(chǎn)物的合成和積累有一定 的調(diào)控作用，但很少將其應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐中。本發(fā)明首次利用LED光源UVA對(duì)人工栽培搬藤 進(jìn)行福射處理，用W調(diào)控搬藤中黃酬類成分一抽皮巧的含量，并將其轉(zhuǎn)化為療效更為顯著 的成分一新北美圣草巧。國(guó)內(nèi)外尚未有相關(guān)研究人員或生產(chǎn)企業(yè)對(duì)搬藤中抽皮巧的含量進(jìn) 行調(diào)控。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了解決上述問題，本發(fā)明提供一種UVA調(diào)控搬藤抽皮巧含量的方法。
[0006] -方面，本發(fā)明一種UVA調(diào)控搬藤抽皮巧含量的方法，其為利用80-320KJ/m2的福 射劑量福射搬藤植株，調(diào)控搬藤抽皮巧向新北美圣草巧轉(zhuǎn)化，優(yōu)選地，福射劑量為160KJ/ O m O
[0007] 其中，所述的UVA優(yōu)選為L(zhǎng)邸光源UVA。
[000引其中，所述的L抓光源UVA的波長(zhǎng)優(yōu)選為365nm，功率優(yōu)選為30-50W，光源距離植株 優(yōu)選 8-15cm。
[0009] 其中，所述搬藤植株為3-5年生搬藤。
[0010] 另一方面，本發(fā)明提供一種提高搬藤新北美圣草巧含量的方法，其為用UVA福射搬 藤植株，UVA的福射劑量為80-320KJ/m 2，優(yōu)選地，福射劑量為160KJ/m2。
[0011] 其中，所述的UVA優(yōu)選為L(zhǎng)邸光源UVA。
[0012] 其中，所述的L抓光源UVA的波長(zhǎng)優(yōu)選為365nm，功率優(yōu)選為30-50W，光源距離植株 優(yōu)選 8-15cm。
[0013] 其中，所述搬藤植株為3-5年生搬藤。
[0014] 與未用本發(fā)明方法處理的對(duì)照組相比，處理組抽皮巧的含量降低了 56%，而新北 美圣草巧的含量升高了 5.4倍，并且兩成分的總量與對(duì)照無(wú)顯著差異。本發(fā)明方法有效地調(diào) 控了搬藤抽皮巧向藥用價(jià)值更高的新北美圣草巧的轉(zhuǎn)化。該發(fā)明經(jīng)濟(jì)實(shí)用、簡(jiǎn)便易行，可W 將此應(yīng)用于人工栽培搬藤有效成分的調(diào)控中，進(jìn)而促進(jìn)人工栽培搬藤作為骨碎補(bǔ)藥材的生 產(chǎn)實(shí)踐，緩解生態(tài)壓力，并推動(dòng)我國(guó)傳統(tǒng)中藥骨碎補(bǔ)的大規(guī)模開發(fā)利用和推廣，加快中藥現(xiàn) 代化的實(shí)施進(jìn)程。
【具體實(shí)施方式】
[0015] W下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
[0016] 實(shí)驗(yàn)材料
[0017] 植物材料:溫室中人工繁殖栽培的=年生搬藤植株；
[0018] 光源:L邸光源-UVA，波長(zhǎng)365nm，功率40W，光源距離植株IOcm;
[0019] 儀器與設(shè)備:培養(yǎng)架、粉碎機(jī)、自動(dòng)磨樣機(jī)、超低溫保存冰箱、超聲波清洗儀、冷凍 干燥機(jī)、干燥器、離屯、機(jī)、安捷倫高效液相色譜儀(DAD檢測(cè)器)等。
[0020] 試劑:色譜級(jí)甲醇、超純水、抽皮巧標(biāo)準(zhǔn)品、新北美標(biāo)準(zhǔn)品等。
[0021 ]實(shí)驗(yàn)方法
[0022] 應(yīng)用L邸光源UVA連續(xù)福射搬藤植株一定劑量后取樣，測(cè)定其根狀莖中抽皮巧和新 北美圣草巧的含量變化情況。
[0023] 福射劑量:80KJ/m2、160KJ/m2、320KJ/m2。
[0024] 對(duì)照:未經(jīng)紫外福射的同批次搬藤植株。
[0025] 液相色譜條件：W十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；W純乙臘、0.1 %甲酸水為流 動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。
[0026] 有效成分提取方法:取福射處理后的搬藤植株，去掉葉片和根，只留根狀莖。用刷 子刷去泥±，洗凈后放入自動(dòng)磨樣機(jī)中研磨成粉末，將粉末裝入EP管中，迅速轉(zhuǎn)入液氮中速 凍，然后放入冷凍干燥機(jī)內(nèi)進(jìn)行干燥，徹底干燥后取搬藤根狀莖干粉20mg，精密稱定，置于 1.5ml離屯、管中，加80%甲醇ImL，超聲提取30min，4°C過夜，再次超聲提取30min，離屯、，將上 清液轉(zhuǎn)移到新的離屯、管中，4°C離屯、（10000轉(zhuǎn)/min)3次，每次lOmin，即得搬藤有效成分提取 液。
[0027] 抽皮巧標(biāo)準(zhǔn)品配制：取抽皮巧對(duì)照品3.2mg，精密稱定，加甲醇55化L制成IOM mo 1 的抽皮巧標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
[0028] 抽皮巧標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：分別配制1.875M mol、3.75M mol、7.5M mol、15M mol和 30M mol的抽皮巧標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按照W上色譜條件進(jìn)樣，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行回歸計(jì)算，得 出標(biāo)準(zhǔn)曲線為:y = 805.71x+838.59，R2 = 0.9981。
[0029] 新北美圣草巧標(biāo)準(zhǔn)品配制：取新北美圣草巧標(biāo)準(zhǔn)品Img，精密稱定，加甲醇167.化L 制成1 OMmo 1濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
[0030] 新北美圣草巧標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：分別配制0.38M mol、0.75M mol、1.5M mol、3M mol、6M mol的新北美圣草巧標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按照W上色譜條件進(jìn)樣，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行回 歸計(jì)算，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線為:y = 870.70x巧54.22，R2 = 0.9962。
[0031 ]實(shí)施例1 80KJ/m2的UVA福射搬藤對(duì)抽皮巧和新北美圣草巧含量的影響
[0032] 取6株長(zhǎng)勢(shì)一致的3年生搬藤植株，其中3株作為對(duì)照，另3株置于LED光源UVA下進(jìn) 行福射，當(dāng)福射劑量累積至80KJ/V時(shí)停止處理。利用HPLC分析兩種主效成分抽皮巧和新北 美圣草巧的含量，進(jìn)樣量為40yL。得到色譜圖，分析搬藤中抽皮巧和新北美圣草巧的含量。
[0033] 表 1
[0035] 經(jīng)SPSS分析，L抓光源UVA 80KJ/V的福射劑量處理后，搬藤中的抽皮巧、新北美圣 草巧及兩成分的總含量與對(duì)照相比均沒有顯著差異。經(jīng)SPSS分析，L抓光源UVA 80KJ/V的 福射劑量處理后，搬藤中的抽皮巧及兩成分的總含量與對(duì)照相比沒有顯著差異，而新北美 圣草巧的含量顯著升高。
[0036] 實(shí)施例2 160KJ/m2的UVA福射搬藤對(duì)抽皮巧和新北美圣草巧含量的影響
[0037] 取6株長(zhǎng)勢(shì)一致的3年生搬藤植株，其中3株作為對(duì)照，另3株置于LED光源UVA下進(jìn) 行福射，當(dāng)福射劑量累積至160KJ/V時(shí)停止處理。利用HPLC分析兩種主效成分抽皮巧和新 北美圣草巧的含量，進(jìn)樣量為40yL。得到色譜圖，分析搬藤中抽皮巧和北美圣草巧的含量。 [00；3引 表2
[0040]經(jīng)SPSS分析，L抓光源UVA 160KJ/m2的福射劑量處理后，搬藤中的抽皮巧含量下 降，新北美圣草巧極顯著上升，為對(duì)照的5.4倍，并且兩成分的總含量與對(duì)照相比均沒有顯 著差異。由此可見，L抓光源UVA 160KJ/V的福射劑量極顯著調(diào)控了抽皮巧向新北美圣草巧 的轉(zhuǎn)化。
[0041 ]實(shí)施例3 320KJ/m2的UVA福射搬藤對(duì)抽皮巧和新北美圣草巧含量的影響
[0042] 取6株長(zhǎng)勢(shì)一致的3年生搬藤植株，其中3株作為對(duì)照，另3株置于LED光源UVA下進(jìn) 行福射，當(dāng)福射劑量累積至320KJ/V時(shí)停止處理。利用HPLC分析兩種主效成分抽皮巧和新 北美圣草巧的含量，進(jìn)樣量為40化。得到色譜圖，分析搬藤中抽皮巧和新北美圣草巧的含 量。
[0043] 表 3
[0046] 經(jīng)SPSS分析，L抓光源UVA 320KJ/m2的福射劑量處理后，搬藤中的抽皮巧含量下 降，新北美圣草巧顯著上升，為對(duì)照的5.0倍，并且兩成分的總含量與對(duì)照相比均沒有顯著 差異。由此可見，L邸光源UVA 320KJ/m2的福射劑量同樣調(diào)控了抽皮巧向新北美圣草巧的轉(zhuǎn) 化。
[0047] 綜上:L抓光源UVA 80KJ/m2的福射劑量處理后，搬藤中新北美圣草巧的含量顯著 上升；160KJ/V的福射劑量處理后，搬藤中的抽皮巧含量下降，新北美圣草巧極顯著上升， 為對(duì)照的5.4倍，并且兩成分的總含量與對(duì)照相比沒有顯著差異;320KJ/V的福射劑量處理 后，搬藤中的抽皮巧含量下降，新北美圣草巧顯著上升，為對(duì)照的5.0倍，并且兩成分的總含 量與對(duì)照相比均沒有顯著差異。由此可見，L抓光源160KJ/V的UVA福射最大效率地調(diào)控了 搬藤抽皮巧向藥用價(jià)值更高的新北美圣草巧的轉(zhuǎn)化。
[004引 W上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可W做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，運(yùn)些改進(jìn)和潤(rùn)飾 也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種UVA調(diào)控槲蕨柚皮苷含量的方法，其特征在于，利用80-320KJ/V的輻射劑量輻射 槲蕨植株，調(diào)控槲蕨柚皮苷向新北美圣草苷轉(zhuǎn)化。2. 如權(quán)利要求1所述的UVA調(diào)控槲蕨柚皮苷含量的方法，其特征在于，所述的UVA為L(zhǎng)ED 光源UVA。3. 如權(quán)利要求2所述的UVA調(diào)控槲蕨柚皮苷含量的方法，其特征在于，所述的LED光源 UVA的波長(zhǎng)為365nm，功率30-50W，光源距離植株8-15cm〇4. 如權(quán)利要求1所述的UVA調(diào)控槲蕨柚皮苷含量的方法，其特征在于，所述槲蕨植株為 3-5年生槲蕨。5. 如權(quán)利要求1所述的U V A調(diào)控槲蕨柚皮苷含量的方法，其特征在于，輻射劑量為 160KJ/m2。6. -種提高槲蕨新北美圣草苷含量的方法，其特征在于，用UVA輻射槲蕨植株，UVA的輻 射劑量為80_320KJ/m 2。7. 如權(quán)利要求6所述的提高槲蕨新北美圣草苷含量的方法，其特征在于，所述的UVA為 LED 光源 UVA。8. 如權(quán)利要求7所述的提高槲蕨新北美圣草苷含量的方法，其特征在于，所述的LED光 源UVA的波長(zhǎng)為365nm，功率30-50W，光源距離植株8-15cm〇9. 如權(quán)利要求6所述的提高槲蕨新北美圣草苷含量的方法，其特征在于，所述槲蕨植株 為3-5年生槲蕨。10. 如權(quán)利要求6所述的提高槲蕨新北美圣草苷含量的方法，其特征在于，輻射劑量為 160KJ/m2。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種UVA調(diào)控槲蕨柚皮苷含量的方法，利用80-320KJ/m2的輻射劑量輻射槲蕨植株，調(diào)控槲蕨柚皮苷向新北美圣草苷轉(zhuǎn)化。與未用本發(fā)明方法處理的對(duì)照組相比，處理組柚皮苷的含量降低了56％，而新北美圣草苷的含量升高了5.4倍，并且兩成分的總量與對(duì)照無(wú)顯著差異。本發(fā)明方法有效地調(diào)控了槲蕨柚皮苷向藥用價(jià)值更高的新北美圣草苷的轉(zhuǎn)化。該發(fā)明經(jīng)濟(jì)實(shí)用、簡(jiǎn)便易行，可以將此應(yīng)用于人工栽培槲蕨有效成分的調(diào)控中，進(jìn)而促進(jìn)人工栽培槲蕨作為骨碎補(bǔ)藥材的生產(chǎn)實(shí)踐，緩解生態(tài)壓力，并推動(dòng)我國(guó)傳統(tǒng)中藥骨碎補(bǔ)的大規(guī)模開發(fā)利用和推廣，加快中藥現(xiàn)代化的實(shí)施進(jìn)程。
【IPC分類】A01G7/04
【公開號(hào)】CN105660215
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610151150
【發(fā)明人】石雷, 黃鳳杰, 李楊, 李 東, 姚然, 王頔, 楊華
【申請(qǐng)人】中國(guó)科學(xué)院植物研究所
【公開日】2016年6月15日
【申請(qǐng)日】2016年3月16日