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一種溫度誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法

文檔序號:39729057發(fā)布日期:2024-10-22 13:33閱讀:58來源:國知局
一種溫度誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法

本發(fā)明涉及海洋農(nóng)業(yè)中貝類遺傳育種領(lǐng)域,特別涉及一種人工誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法。


背景技術(shù):

1、皺紋盤鮑(haliotisdiscushannai)是我國一種重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟貝類,近年來已逐步成為我國南方海區(qū)鮑類養(yǎng)殖的主要品種。

2、由于三倍體鮑的配子為非整倍體,其用于性腺發(fā)育的代謝能全部用于生長,因此,三倍體鮑有個體大、生長快、肉質(zhì)好等優(yōu)點,且由于其不育性和雜合性而表現(xiàn)出更好的生長和抗逆性。因此,三倍體鮑具有巨大的市場潛力和商業(yè)價值,能夠大大加快產(chǎn)品上市時間且得到質(zhì)量更高的個體。

3、鮑三倍體誘導(dǎo)常用的方法主要是物理法和化學(xué)法,包括冷休克法、靜水壓法、藥物誘導(dǎo)法,均可通過阻斷減數(shù)分裂誘導(dǎo)出最具商業(yè)價值的同源和異源三倍體鮑。或者也可通過交配四倍體鮑和二倍體鮑來產(chǎn)生三倍體個體,但目前四倍體成體存活率并不高,很難進行推廣?;瘜W(xué)法誘導(dǎo)存在藥物殘留及毒性問題,且幼蟲致畸率較高。

4、為了解決上述技術(shù)難題,本申請?zhí)岢隼脺囟刃菘朔ㄈ斯ふT導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體。相較于現(xiàn)有技術(shù)而言,溫度休克法設(shè)備簡便、價格低廉,更適合大規(guī)模生產(chǎn)。此法選育出的皺紋盤鮑三倍體具有耐熱性,可減少漁戶因鮑度夏難而導(dǎo)致的經(jīng)濟損失。因此,開展皺紋盤鮑三倍體誘導(dǎo)技術(shù)研究,生產(chǎn)皺紋盤鮑三倍體苗種,對推動我國皺紋盤鮑產(chǎn)業(yè)技術(shù)升級具有重要意義。


技術(shù)實現(xiàn)思路

1、有鑒于此,本發(fā)明提供了一種人工誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法,通過該方法可高效獲得皺紋盤鮑三倍體。

2、為了實現(xiàn)上述的技術(shù)目的,本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為:

3、本發(fā)明提供了一種人工誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法,包括如下步驟:

4、將精子和卵子混合,進行人工受精;受精15min后,將受精卵置于預(yù)熱的海水中進行熱休克處理,以抑制受精卵第二極體的排出;熱休克處理的溫度為26~31℃,時間為10~15min。

5、作為優(yōu)選,精子與卵子的體積比為(9~11):1。

6、在本發(fā)明提供的具體實施例中,精子與卵子的體積比為10:1。

7、作為優(yōu)選,受精15min后,對受精卵進行熱休克處理。

8、作為優(yōu)選,熱休克處理的溫度為28~30℃,時間為10~15min。

9、更優(yōu)選地,熱休克處理的溫度為28~30℃,時間為12~15min。

10、本發(fā)明提供了一種人工誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法。該方法包括如下步驟:

11、1)種鮑的促熟及選擇:取殼長為65mm~80mm,個體活力良好且無外部損傷的皺紋盤鮑作為種鮑,按雌雄分別放置于種鮑培育池中促熟,從中選擇出性腺發(fā)育良好且飽滿的二倍體鮑;按雌雄分別放置于種鮑培育池中促熟,從中選擇出性腺發(fā)育良好且飽滿的二倍體鮑;所述種鮑為3齡皺紋盤鮑;所述性腺發(fā)育良好的雌性個體的性腺接近墨綠色,性腺飽滿;所述倍性確定的方法是剪取鮑部分上足觸手用于流式細胞儀檢測。所述種鮑培育池內(nèi)性別特征必須單一。

12、2)人工催產(chǎn):將種鮑陰干2h~2.5h后,將雌雄個體嚴格區(qū)分置于不同水箱中,注入照射強度為800~1200mwh/l紫外線處理海水,每隔1h更換一次海水直至配子排放,期間注意防止意外受精并及時查看種鮑情況;

13、3)配子的選擇和混合受精:使用300目的篩絹濾除步驟2)配子中的雜質(zhì),鏡檢選擇質(zhì)量高的卵子和活力強的精子。將活力好的精子和質(zhì)量高的卵子以質(zhì)量比為(9~11)︰1進行混合,分為處理組和對照組,此時受精溫度可為18~22℃,鹽度為30~35;

14、4)熱休克誘導(dǎo):配子受精15min后觀察到受精卵出現(xiàn)第一極體比例為60%~80%時,將受精卵收集至溫度為26~31℃海水中處理10~15min;

15、5)孵育:熱休克結(jié)束后立即將受精卵收集至18~22℃孵育水箱中,按照常規(guī)孵化及后期培育方法進行孵育,后續(xù)使用流式細胞儀確定擔(dān)輪幼蟲三倍體率。

16、本發(fā)明具有的技術(shù)效果為:

17、本發(fā)明制備人工誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法,實現(xiàn)了熱休克誘導(dǎo)可培育出人工三倍體鮑苗,提高了多倍體育苗效率。與已有鮑三倍體制備方法相比,本發(fā)明通過改良親鮑催產(chǎn)方式、優(yōu)化誘導(dǎo)條件(熱休克處理溫度及時間),從而實現(xiàn)皺紋盤鮑三倍體的高效穩(wěn)定獲得。本技術(shù)操作方便、高效實用,便于大量推廣。此法選育出的皺紋盤鮑三倍體具有耐熱性,可減少漁戶因鮑度夏難而導(dǎo)致的經(jīng)濟損失。在皺紋盤鮑生產(chǎn)和多倍體選育優(yōu)良品種上具有重大應(yīng)用價值和廣闊的應(yīng)用前景。

18、1、高效催產(chǎn)方式:采用陰干結(jié)合紫外線照射海水刺激的方法,確保種鮑能順利排出高質(zhì)量配子,便于后續(xù)受精及誘導(dǎo)。

19、2、優(yōu)化誘導(dǎo)條件:精卵混合5min后,不段使用普通光學(xué)顯微鏡連續(xù)觀察受精卵情況。受精約15min后,當(dāng)?shù)谝粯O體出現(xiàn)60%~80%時進行誘導(dǎo)處理,確保實驗穩(wěn)定性,提高三倍體率。

20、3、簡單無害的誘導(dǎo)方式:熱休克誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法,設(shè)備簡便、價格低廉,更適合大規(guī)模生產(chǎn)。



技術(shù)特征:

1.一種人工誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法,其特征在于,將精子和卵子混合,進行人工受精;受精15min后,觀察到受精卵出現(xiàn)第一極體比例為60%~80%時,將受精卵置于預(yù)熱的海水中進行熱休克處理,以抑制受精卵第二極體的排出;熱休克處理的溫度為26~31℃,時間為10~15min。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法,其特征在于,具體包括以下步驟:

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述人工誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法,其特征在于,在步驟1)中,所述種鮑的促熟及選擇的具體方法為:取殼長為65mm~80mm,個體活力良好且無外部損傷的皺紋盤鮑作為種鮑,按雌雄分別放置于種鮑培育池中促熟,從中選擇出性腺發(fā)育良好且飽滿的二倍體鮑;所述種鮑為3齡皺紋盤鮑。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述人工誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法,其特征在于在步驟2)中,所述人工催產(chǎn)的具體方法為:采用陰干結(jié)合紫外線照射海水刺激的方法對性腺發(fā)育成熟的個體進行催產(chǎn),直至雌雄種鮑產(chǎn)卵和排精為止;所述陰干結(jié)合紫外線照射海水刺激的方法為:種鮑陰干2h~2.5h后,將雌雄個體嚴格區(qū)分置于不同水箱中,注入照射強度為800~1200mwh/l紫外線處理海水,每隔1h更換一次海水直至配子排放,期間注意防止意外受精并及時查看種鮑情況。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述人工誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法,其特征在于在步驟3)中,所述配子的選擇的具體方法為:使用300目的篩絹濾除步驟2)配子中的雜質(zhì),鏡檢選擇質(zhì)量高的卵子和活力強的精子;所述質(zhì)量高的卵子是指新鮮卵液中的卵子應(yīng)卵膜完整、形狀規(guī)則且不存在意外受精;所述活力好的精子是指活動性和分散度良好的新鮮精子。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述人工誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法,其特征在于在步驟3)中,所述混合受精的具體方法為:將確定的活力好和質(zhì)量高的精子和卵子混合,分為處理組和對照組,所述精子與卵子的質(zhì)量比為(9~11)︰1;所述受精溫度為18~22℃,鹽度為30~35。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述人工誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法,其特征在于,在步驟4)中,熱休克誘導(dǎo)過程中持續(xù)監(jiān)控海水溫度的穩(wěn)定性,并使用顯微鏡不斷觀察受精卵的發(fā)育情況。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述人工誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法,其特征在于,在步驟5)中,所述孵育的具體方法為:熱休克結(jié)束后立即將受精卵收集至18~22℃孵育水箱中;按照常規(guī)孵化及后期培育方法進行,后續(xù)使用流式細胞儀確定擔(dān)輪幼蟲三倍體率。


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及貝類遺傳育種領(lǐng)域,特別涉及一種人工誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法。該方法包括以下步驟:1)種鮑的促熟及選擇:選取無病害種鮑置于種鮑培育池中同步促熟,從中選擇性腺發(fā)育良好的二倍體鮑;2)人工催產(chǎn):將挑選的種鮑進行催產(chǎn),至雌雄種鮑產(chǎn)卵和排精為止;3)配子的選擇和混合受精:分別濾除精卵中的雜質(zhì),將精子與卵子混合進行人工受精,得受精卵;4)熱休克誘導(dǎo):受精15min后,將受精卵置于預(yù)熱溫度為26~31℃的海水中處理10~15min,以抑制受精卵第二極體的排出;5)孵育:熱休克結(jié)束后立即將受精卵收集至孵育水箱中進行孵化培育。此法選育出的皺紋盤鮑三倍體具有耐熱性,可減少漁戶因鮑度夏難而導(dǎo)致的經(jīng)濟損失。通過改良種鮑催產(chǎn)方式,優(yōu)化誘導(dǎo)條件,可實現(xiàn)皺紋盤鮑三倍體的高效穩(wěn)定獲得。

技術(shù)研發(fā)人員:狄桂蘭,陳新華,蔣明媚,張宇,楊威龍,武云龍,馬澤淵
受保護的技術(shù)使用者:福建農(nóng)林大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2024/10/21
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