一種麒麟竭懸浮細(xì)胞的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種麒麟竭懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括麒麟竭外植體的消毒、愈傷組織的誘導(dǎo)、愈傷組織的繼代、愈傷組織的保存等步驟。本發(fā)明方法誘導(dǎo)出大量的麒麟竭細(xì)胞工藝簡單，不受地域，季節(jié)的影響，為麒麟竭的有效利用提供基礎(chǔ)。
【專利說明】 一種麒麟竭懸浮細(xì)胞的快速繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及組培條件下麒麟竭懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)，屬于植物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]麒麟竭，又名:麒麟竭、海蠟、麒麟血，棕櫚科。我國廣東、臺灣一帶生長的一種多年生藤本植物。其葉為羽狀復(fù)葉，小葉為線狀披針形，上有3條縱行的脈。果實卵球形，外有光亮的黃色鱗片。它通常纏繞在其他樹木上，它的莖可以長達(dá)10余米。如果把它砍斷或切開一個口子，血一樣的樹脂流出來，干后凝結(jié)成血塊狀的東西。這是很珍貴的中藥，稱之為“血竭” “麒麟竭”。經(jīng)分析，血竭中含有鞣質(zhì)、還原性糖和樹脂類的物質(zhì)，可治療筋骨疼痛，并有散氣、去痛、祛風(fēng)、通經(jīng)活血之效，除莖之外，果實也可流出血樣的樹脂。主治跌打腫痛，內(nèi)傷瘀痛；外傷出血不止，瘰疬，臁瘡潰久不合，目前關(guān)于其栽植方法尚待研究。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明研究了一種麒麟竭懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，本發(fā)明方法具有細(xì)胞工藝簡單，不受地域，季節(jié)的影響等特點(diǎn)，為麒麟竭的有效利用提供基礎(chǔ)。
[0004]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用下列技術(shù)方案:
取幼嫩的麒麟竭葉片流水沖洗0.5h，在超凈工作臺上，3%過氧化氫處理6min，無菌水沖洗干凈，切成0.4X0.4的正方體小塊，消毒處理過的麒麟竭嫩葉接種到C17+NAA0.5mg/L+KT3mg/L的培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖40g/L，瓊脂7g/L，培養(yǎng)溫度25°C，光照強(qiáng)度1501x，每天光照8h，誘導(dǎo)出來的愈傷組織接種入C17+NAA0.01-0.02mg/L+6-BAl-2mg/L+香蕉泥100_150mg/L的培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的繼代培養(yǎng)，附加蔗糖20g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照3001x，光期12h/d，溫度25°C，培養(yǎng)出來的顏色翠綠松散性良好的愈傷組織放入液氮中進(jìn)行低溫保存。
[0005]采用本發(fā)明制備的麒麟竭懸浮細(xì)胞，生長速度快，儲藏良好，可以提供大量原料。
[0006]下面將結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實施方式。

【具體實施方式】
[0007]實施例1
取幼嫩的麒麟竭葉片流水沖洗0.5h，在超凈工作臺上，3%過氧化氫處理6min，無菌水沖洗干凈，切成0.4X0.4的正方體小塊，消毒處理過的麒麟竭嫩葉接種到C17+NAA0.5mg/L+KT3mg/L的培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖40g/L，瓊脂7g/L，培養(yǎng)溫度25°C，光照強(qiáng)度1501x,每天光照8h,誘導(dǎo)出來的愈傷組織接種入C17+NAA0.0lmg/L+6-BAlmg/L+香蕉泥100mg/L的培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的繼代培養(yǎng)，附加蔗糖20g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照3001x，光期12h/d，溫度25°C，培養(yǎng)出來的顏色翠綠松散性良好的愈傷組織放入液氮中進(jìn)行低溫保存，懸浮細(xì)胞的增長率70%。
[0008]實施例2
取幼嫩的麒麟竭葉片流水沖洗0.5h，在超凈工作臺上，3%過氧化氫處理6min，無菌水沖洗干凈，切成0.4X0.4的正方體小塊，消毒處理過的麒麟竭嫩葉接種到C17+NAA0.5mg/L+KT3mg/L的培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖40g/L，瓊脂7g/L，培養(yǎng)溫度25°C，光照強(qiáng)度1501x，每天光照8h，誘導(dǎo)出來的愈傷組織接種入C17+NAA0.02mg/L+6-BA2mg/L+香蕉泥150mg/L的培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的繼代培養(yǎng)，附加蔗糖20g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照3001x，光期12h/d，溫度25°C，培養(yǎng)出來的顏色翠綠松散性良好的愈傷組織放入液氮中進(jìn)行低溫保存，懸浮細(xì)胞增長率72%。
[0009]實施例3
取幼嫩的麒麟竭葉片流水沖洗0.5h，在超凈工作臺上，3%過氧化氫處理6min，無菌水沖洗干凈，切成0.4X0.4的正方體小塊，消毒處理過的麒麟竭嫩葉接種到C17+NAA0.5mg/L+KT3mg/L的培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖40g/L，瓊脂7g/L，培養(yǎng)溫度25°C，光照強(qiáng)度1501x，每天光照8h，誘導(dǎo)出來的愈傷組織接種入C17+NAA0.02mg/L+6-BA2mg/L+香蕉泥100mg/L的培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的繼代培養(yǎng)，附加蔗糖20g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照3001x，光期12h/d，溫度25°C，培養(yǎng)出來的顏色翠綠松散性良好的愈傷組織放入液氮中進(jìn)行低溫保存，懸浮細(xì)胞增長率71%。
【權(quán)利要求】
1.一種麒麟竭懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括麒麟竭外植體的消毒、愈傷組織的誘導(dǎo)、愈傷組織的繼代、愈傷組織的保存，其主要步驟如下: (1)取麒麟竭的嫩葉，進(jìn)行消毒處理； (2)將步驟(I)消毒處理過的麒麟竭嫩葉接種到C17+NAA0.5mg/L+KT3mg/L的培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖40g/L，瓊脂7g/L，培養(yǎng)溫度25°C，光照強(qiáng)度1501x，每天光照8h ； (3)取步驟(2)誘導(dǎo)出來的愈傷組織接種入C17+NAA0.01-0.02mg/L+6-BAl-2mg/L+香蕉泥100-150mg/L的培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的繼代培養(yǎng)，附加蔗糖20g/L，瓊脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照 3001χ，光期 12h/d，溫度 25 °C ； (4)將步驟(3)培養(yǎng)出來的顏色翠綠松散性良好的愈傷組織放入液氮中進(jìn)行低溫保存。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種麒麟竭懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(4)中所述麒麟竭無菌葉片的獲得為取幼嫩的麒麟竭葉片流水沖洗0.5h，在超凈工作臺上，3%過氧化氫處理6min，無菌水沖洗干凈，切成0.4X0.4的正方體小塊。
【文檔編號】A01H4/00GK104221868SQ201410540400
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年10月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月14日
【發(fā)明者】劉東鋒, 楊成東 申請人:南京帝道農(nóng)業(yè)科技有限公司