專利名稱：一種枇杷茶快速繁殖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物快速繁殖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種枇杷茶快速繁殖的方法。
背景技術(shù)：
批把茶(Cameliasinensis cv. Chongqing pipacha)屬于山茶科(Theaceae)山茶屬(Camelia)常綠喬木，主要分布在四川省崇州市、大邑縣等地區(qū)。枇杷茶產(chǎn)量高、品質(zhì)好，是四川省茶樹良種委員會認(rèn)定的省級傳統(tǒng)良種之一，且被評為四川省地理標(biāo)志農(nóng)產(chǎn)品。 除此之外，枇杷茶花冠大，花蕊金黃色，具有濃烈的芳香氣，且其花期較長，幾乎在整個冬季都開放，具有很好的觀賞價值。目前，枇杷茶的繁殖手段還主要依靠傳統(tǒng)的種子繁殖和扦插繁殖。這兩種方法都存在如下缺陷(I)繁殖的周期長，扦插繁殖一般需要12-14個月，種子繁殖的周期更長；
(2)繁殖系數(shù)比較低，尤其是扦插繁殖；(3)由種子自然育種不易于優(yōu)良性狀的保持；(4)容易受季節(jié)和地域限制，因栽種枇杷茶需要充足的水分和適宜的pH?，F(xiàn)有技術(shù)中雖然有少量的有關(guān)植物快速繁殖方法的報道，但I(xiàn))目前還沒有關(guān)于枇杷茶離體快繁的信息；2)鑒于各植物品種的基因特性，公開的快繁方法無法直接用于枇杷茶的快繁中。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提供一種枇杷茶快速繁殖的方法。本發(fā)明提供的一種枇杷茶快速繁殖的方法，其特征在于該方法的操作步驟和條件如下I)選取室內(nèi)枇杷茶扦插苗帶芽莖段l-2cm作為組織培養(yǎng)的外植體；2)將外植體先用肥皂水清洗15_20min，然后用質(zhì)量百分濃度為O. 5%的多菌靈浸泡15-25min，再用流水沖洗l_3h，吸干外植體表面水分，去掉芽外層及莖段上的小葉片；3)將外植體先在無菌條件下用體積百分濃度為70-75%的酒精消毒30_40s，然后用質(zhì)量百分濃度為O. 08-0. 12%的升汞消毒9-llmin，無菌水沖洗4_5遍,再用質(zhì)量百分濃度為O. 04-0. 06%的升萊消毒3-4min,無菌水沖洗4_5遍,將消毒后的外植體接種在MS培養(yǎng)基中，于溫度23-25°C，光照強(qiáng)度1000-15001X，每天光照12h的條件下，培養(yǎng)15天，篩選出存活的無菌材料；4)將獲得的無菌材料轉(zhuǎn)接在啟動培養(yǎng)基中，于溫度23-25 °C，光照強(qiáng)度 1000-15001x，每天光照12h的條件下，培養(yǎng)15-30天，誘導(dǎo)成芽；5)將發(fā)芽的無菌材料轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，于溫度23-25 °C，光照強(qiáng)度 1000-15001x,每天光照12h的條件下，培養(yǎng)20-60天，即得平均增殖系數(shù)為3. 31-4. 86的叢生芽。所獲得的叢生芽既可分離進(jìn)行后續(xù)的生根培育、栽種，也可將該叢生芽再反復(fù)進(jìn)行第4)、5)步驟的培育，以獲得更多的叢生芽，然后再進(jìn)行后續(xù)的生根培育、栽種。
以上方法中所述的啟動培養(yǎng)基的組成為在MS培養(yǎng)基中添加6-芐基腺嘌呤2 3mg/L、n引哚乙酸 O. 05 O. 5mg/L、赤霉素 O. 5 I. Omg/L。以上方法中所述的增殖培養(yǎng)基的組成為在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加噻苯隆 l-2mg/L,赤霉素 O. 5-1. Omg/L。在啟動培養(yǎng)基和增殖培養(yǎng)基中添加的植物激素單位mg/L是指每升培養(yǎng)基中添加激素為多少mg。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)I.由于本發(fā)明選取的枇杷茶扦插苗帶芽莖段是在室內(nèi)培育的，本身帶菌較之室外培育的少，加之選取滅菌方式和條件適當(dāng)，因而可獲得滅菌存活率高達(dá)88. 5%的無菌材料。2.由于本發(fā)明同時采用了既有利于芽啟動的培養(yǎng)基，又有利于芽增殖的增殖培養(yǎng)基，因而不僅使出芽時間短，而且增殖速度快，可在三個月時間內(nèi)獲得平均增殖系數(shù)高達(dá) 4. 86的叢生芽，其增殖速度大大高于枇杷茶的現(xiàn)有繁殖手段。3.由于本發(fā)明增殖產(chǎn)生的芽和枝干都是由外植體原本存在的營養(yǎng)分生組織發(fā)育而來，因而可保持原無性系的基因型和表現(xiàn)型的優(yōu)良性狀。4.由于本發(fā)明是在室內(nèi)操作完成，因而不受季節(jié)和地域限制。
具體實(shí)施例方式下面給出實(shí)施例以對本發(fā)明作更詳細(xì)的說明，有必要指出的是以下實(shí)施例不能理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，該領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員根據(jù)上述本發(fā)明內(nèi)容對本發(fā)明作出的一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整仍屬本發(fā)明的保護(hù)范圍。值得說明的是，I)以下實(shí)施例和比較例中酒精的濃度為體積百分濃度；多菌靈和升汞的濃度為質(zhì)量百分濃度。2)以下實(shí)施例和比較例中的MS為基本培養(yǎng)基；BA為6-芐基腺嘌呤'Ikk為吲哚乙酸；GA3為赤霉素；TDZ為噻苯隆。實(shí)施例I取培養(yǎng)室內(nèi)枇杷茶扦插苗上新萌發(fā)的帶芽莖段l-2cm，先放入肥皂水中振搖清洗 15min，然后放入O. 5%多菌靈浸泡15min，流水沖洗2h，用濾紙吸干外植體表面水分，去掉芽外層及莖段上的小葉片；將外植體先在無菌操作臺上用濃度70%的酒精消毒30s，然后用濃度O. 08%的升汞消毒9min，無菌水沖洗4遍，將莖段基部切去，再用濃度O. 04%的升汞消毒3. 5min,無菌水沖洗4遍；將消毒后的外植體接種在加有MS培養(yǎng)基的IOOml三角瓶里，每瓶接種I個外植體，每次接種15瓶，重復(fù)2次，然后放入組培室內(nèi)，于溫度24°C，光照強(qiáng)度15001x，每天光照12h的條件下進(jìn)行培養(yǎng)以篩選無菌材料，第7和15天后統(tǒng)計(jì)結(jié)果，污染率分別為15. 3 %、20. 3 %，褐化率分別為3. 5 %、5. 7 %，存活率分別為84. 2 %、74. O %。實(shí)施例2取培養(yǎng)室內(nèi)枇杷茶扦插苗上新萌發(fā)的帶芽莖段l-2cm，先放入肥皂水中振搖清洗 18min，然后放入O. 5%多菌靈浸泡25min，流水沖洗3h，用濾紙吸干外植體表面水分，去掉芽外層及莖段上的小葉片；將外植體先在無菌操作臺上用濃度75%的酒精消毒40s，然后用濃度O. 12%的升汞消毒llmin，無菌水沖洗4遍，將莖段基部切去，再用濃度O. 06%的升汞消毒4min，無菌水沖洗5遍；將消毒后的外植體接種在加有MS培養(yǎng)基的IOOml三角瓶里， 每瓶接種I個外植體，每次接種15瓶，重復(fù)2次，然后放入組培室內(nèi)，于溫度23°C，光照強(qiáng)度12001x,每天光照12h的條件下進(jìn)行培養(yǎng)以篩選無菌材料，第7和15天后統(tǒng)計(jì)結(jié)果，污染率分別為5. O %、7. 7 %，褐化率分別為7. 5 %、13. O %，存活率分別為87. 5 %、79. 3 %。實(shí)施例3取培養(yǎng)室內(nèi)枇杷茶扦插苗上新萌發(fā)的帶芽莖段l-2cm，先放入肥皂水中振搖清洗 20min，然后放入O. 5%多菌靈浸泡20min，流水沖洗lh，用濾紙吸干外植體表面水分，去掉芽外層及莖段上的小葉片；將外植體先在無菌操作臺上用濃度72%的酒精消毒35s，然后用濃度O. 10%的升汞消毒lOmin，無菌水沖洗5遍，將莖段基部切去，再用濃度O. 05%的升汞消毒3min，無菌水沖洗5遍；將消毒后的外植體接種在加有MS培養(yǎng)基的IOOml三角瓶里， 每瓶接種I個外植體，每次接種15瓶，重復(fù)2次，然后放入組培室內(nèi)，于溫度25°C，光照強(qiáng)度 IOOOlx,每天光照12h的條件下進(jìn)行培養(yǎng)以篩選無菌材料，第7和15天后統(tǒng)計(jì)結(jié)果，污染率分別為2. 5%、3. 3%，褐化率分別為4. 5%、7. 7%，存活率分別為93. 0%、88. 5%。實(shí)施例4將以上實(shí)施例1-3所獲得的無菌材料轉(zhuǎn)接在加有組成為MS+2. 5mg/lBA+0. 05mg/ 1IAA+1. 0mg/lGA3的啟動培養(yǎng)基的IOOml三角瓶里，每瓶轉(zhuǎn)接I個無菌材料，轉(zhuǎn)接30瓶，然后放入組培室內(nèi)，于溫度24°C，光照強(qiáng)度15001x，每天光照12h的條件下培養(yǎng)15天，誘導(dǎo)成芽；將發(fā)芽的無菌材料轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)基的組成為MS+1. Omg/ITDZ+O. 5mg/l GA3,然后放入組培室，于溫度23°C，光照強(qiáng)度ΙΟΟΟΙχ，每天光照12h的條件下培養(yǎng)30天，即得叢生芽的平均增殖系數(shù)為3. 31。實(shí)施例5將以上實(shí)施例1-3所獲得的無菌材料轉(zhuǎn)接在加有組成為MS+3. 0mg/lBA+0. Img/ 1IAA+0. 8mg/lGA3的啟動培養(yǎng)基的IOOml三角瓶里，每瓶轉(zhuǎn)接I個無菌材料，轉(zhuǎn)接30瓶，然后放入組培室內(nèi)，于溫度23°C，光照強(qiáng)度12001X，每天光照12h的條件下培養(yǎng)30天，誘導(dǎo)成芽；將發(fā)芽的無菌材料轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)基的組成為MS+1. 0mg/lTDZ+0. 5mg/l GA3,然后放入組培室，于溫度24°C，光照強(qiáng)度12001X，每天光照12h的條件下培養(yǎng)40天，即得叢生芽的平均增殖系數(shù)為4. 22。實(shí)施例6將以上實(shí)施例1-3所獲得的無菌材料轉(zhuǎn)接在加有組成為MS+2. 0mg/lBA+0. 5mg/ 1IAA+0. 5mg/lGA3的啟動培養(yǎng)基的IOOml三角瓶里，每瓶轉(zhuǎn)接I個無菌材料，轉(zhuǎn)接30瓶，然后放入組培室內(nèi)，于溫度25°C，光照強(qiáng)度ΙΟΟΟΙχ，每天光照12h的條件下培養(yǎng)25天，誘導(dǎo)成芽；將發(fā)芽的無菌材料轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)基的組成為MS+2. 0mg/lTDZ+l. 0mg/l GA3,然后放入組培室，于溫度25°C，光照強(qiáng)度15001x，每天光照12h的條件下培養(yǎng)60天，即得叢生芽的平均增殖系數(shù)為4. 86。
權(quán)利要求
1.一種枇杷茶快速繁殖的方法，其特征在于該方法的操作步驟和條件如下1)選取室內(nèi)枇杷茶扦插苗帶芽莖段I 2cm作為組織培養(yǎng)的外植體；2)將外植體先用肥皂水清洗15 20min，然后用質(zhì)量百分濃度為0.5%的多菌靈浸泡 15 25min，再用流水沖洗I 3h，吸干外植體表面水分，去掉芽外層及莖段上的小葉片；3)將外植體先在無菌條件下用體積百分濃度為70-75%的酒精消毒30 40s，然后用質(zhì)量百分濃度為0. 08 0. 12%的升萊消毒9 Ilmin,無菌水沖洗4 5遍,再用質(zhì)量百分濃度為0. 04-0. 06%的升萊消毒3 4min,無菌水沖洗4 5遍,將消毒后的外植體接種在MS培養(yǎng)基中，于溫度23 25°C，光照強(qiáng)度1000 15001x，每天光照12h的條件下，培養(yǎng) 15天，從中篩選出存活的無菌材料；4)將獲得的無菌材料轉(zhuǎn)接在啟動培養(yǎng)基中，于溫度23 25°C，光照強(qiáng)度1000 15001X，每天光照12h的條件下，培養(yǎng)15-30天，誘導(dǎo)成芽；5)將發(fā)芽的無菌材料轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，于溫度23 25°C，光照強(qiáng)度1000 15001x,每天光照12h的條件下，培養(yǎng)20 60天，即得平均增殖系數(shù)為3. 31 4. 86的叢生芽。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的枇杷茶快速繁殖的方法，其特征在于該方法中所述的啟動培養(yǎng)基的組成為在MS培養(yǎng)基中添加6-芐基腺嘌呤2 3mg/L、吲哚乙酸0. 05 0. 5mg/L、 赤霉素0. 5 I. Omg/Lo
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的枇杷茶快速繁殖的方法，其特征在于該方法中所述的增殖培養(yǎng)基的組成為在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加噻苯隆I 2mg/L，赤霉素0. 5 I. Omg/L。
全文摘要
本發(fā)明公開的一種枇杷茶快速繁殖的方法的操作步驟和條件是將室內(nèi)枇杷茶扦插苗帶芽莖段的外植體依次用肥皂水清洗、用多菌靈浸泡、用流水沖洗后，吸干表面水分，去掉芽外層及莖段上的小葉片；再在無菌條件下依次用酒精和升汞消毒，無菌水沖洗，然后接種在MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)并篩選出存活的無菌材料；將無菌材料轉(zhuǎn)接在啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)并誘導(dǎo)成芽；將發(fā)芽的無菌材料轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，即可獲得平均增殖系數(shù)為3.31-4.86的叢生芽。本發(fā)明方法不僅可獲得滅菌存活率高達(dá)88.5％的無菌材料，而且出芽時間短，增殖速度快，可在三個月內(nèi)獲得平均增殖系數(shù)高達(dá)4.86的叢生芽，并能夠保持原無性系的基因型和表現(xiàn)型的優(yōu)良性狀。
文檔編號A01H4/00GK102577975SQ20121006651
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月14日
發(fā)明者唐琳, 李晉宇, 胡洪沙, 陳放 申請人:四川大學(xué), 成都傲佳農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限公司