專利名稱：：一種白靈菇新品種及菌種生產(chǎn)和栽培方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種食用菌新品種及其菌種生產(chǎn)和栽培方法，具體說來是白靈菇(Pleurotusnebrodensis)新品種中農(nóng)1號(CAAS-1)及其菌種生產(chǎn)和栽培方法。
背景技術(shù)：
：白靈菇學(xué)名白靈側(cè)耳(Pleurotusnebrodensis)，屬于真菌界、真菌門、層菌綱、傘菌目、側(cè)耳屬。是一種極為珍貴的大型食用菌，野生資源極其稀少，兼性寄生于半枯死的新疆阿魏的莖基部和根上，子實體肥厚潔白、質(zhì)地細膩爽口，營養(yǎng)豐富，味道鮮美無比，同時具良好的抗衰老作用。由于生態(tài)環(huán)境的逐漸惡化，野生白靈菇資源日漸減少，使其人工栽培走向必然。目前人工栽培品種和菌株均來自新疆野生種質(zhì)，但是子實體發(fā)生的整齊度和形態(tài)的一致性均較差，特別是畸形菇較多，商品率和優(yōu)質(zhì)品率大大降低，生產(chǎn)效益沒有保障，使商業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)受到限制，也嚴重影響產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此，選育出菇整齊、形態(tài)好、形態(tài)一致、商品率高、優(yōu)質(zhì)品率高的優(yōu)良品種成為白靈菇產(chǎn)業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵和第一需要。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于克服白靈菇商業(yè)栽培品種出菇和子實體形態(tài)的不一致性，提供產(chǎn)量高、出菇整齊、菇體形態(tài)一致、掌形、扇貝狀、商品率高、優(yōu)質(zhì)率高的白靈菇品種，同時提供這一品種的菌種生產(chǎn)和關(guān)鍵栽培技術(shù)和方法。本發(fā)明的目的通過如下技術(shù)方案來實現(xiàn)本發(fā)明的白靈菇品種中農(nóng)1號來自新疆野生白靈菇子實體的多孢雜交培養(yǎng)物的篩選，2005年1月20日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGMCCNo1300，分類命名為白靈菇Pleurotusnebrodensis。本發(fā)明白靈菇新品種中農(nóng)1號(CAAS-1)的特征在于1.遺傳學(xué)特征rDNA的IGS2經(jīng)BsuRI酶切，生成7個片斷；經(jīng)Hin6I酶切，生成6個片斷；經(jīng)RsaI酶切，生成3個片斷。IGS2-RFLP圖譜見圖1～圖3。2.子實體形態(tài)特征潔白，菌柄側(cè)生，菌蓋扇貝形，7.5～12.5cm×7.5～11.5cm，多數(shù)11.25cm×10.26cm，菌肉平均厚4.5cm，平均單菇重185g左右，菌柄的長寬比約1∶1，菌蓋的長寬比約1∶1，菌蓋長和菌柄長之比約2.5∶1，典型子實體如圖4。在適宜環(huán)境條件下無畸形菇發(fā)生。子實體形成整齊度和形態(tài)一致性均較高，優(yōu)質(zhì)商品形態(tài)菇占80％以上。3.子實體質(zhì)地中等。4.農(nóng)藝性狀菌絲生長溫度適宜生長溫度20℃～30℃，最適溫度25℃～30℃。水分基質(zhì)含水量70％～75％，出菇期適宜空氣相對濕度75％～85％。栽培培養(yǎng)基配方棉籽殼90％，玉米粉6％，石灰2％，石膏1％，磷酸二氫鉀1％，含水量為料水比1∶1.5～1.6。出菇菌齡100～110天出菇預(yù)處理18℃～20℃后熟30～40天，-5℃～5℃低溫刺激7～14天。出菇環(huán)境條件農(nóng)業(yè)式栽培溫度5℃～18℃，工業(yè)式栽培12℃～15℃，空氣相對濕度75％～85％，光照200～800Lux，通風(fēng)良好，環(huán)境CO2≤400×10-6。一致性農(nóng)藝性狀的一致性良好，表現(xiàn)為子實體形成整齊，批量栽培的子實體20天左右完成一個菇潮，子實體形態(tài)的一致性高于80％，大大高于現(xiàn)有商業(yè)栽培品種。在上述環(huán)境條件下無畸形菇發(fā)生。優(yōu)質(zhì)商品形態(tài)菇占80％以上。本發(fā)明品種的有益效果體現(xiàn)在如下方面1、優(yōu)質(zhì)菇率明顯高于其它品種，一潮菇優(yōu)質(zhì)菇占≥80％，經(jīng)濟效益顯著提高。2、出菇的整齊度大大高于其它品種，同批次的菌袋20天內(nèi)完成菇潮，易于栽培期的管理，提高勞動效率，降低勞動力成本。3、菇體形態(tài)一致性大大高于其它品種，商品率和優(yōu)質(zhì)品率均大大提高。4、菇體形態(tài)較其它品種優(yōu)美，菌蓋扇形，近貝殼狀，更潔白，較其它品種更受市場歡迎，提高生產(chǎn)效益。圖1是白靈菇中農(nóng)1號(CAAS-1)的IGS2經(jīng)BsuRI酶切的電泳圖譜；圖2是白靈菇中農(nóng)1號(CAAS-1)的IGS2經(jīng)Hin6I酶切的電泳圖譜；圖3是白靈菇中農(nóng)1號(CAAS-1)的IGS2經(jīng)RsaI酶切的電泳圖譜；圖中S代表菌株，M代表MarkerλDNA/HindIII+EcoRI。圖4白靈菇中農(nóng)1號(CAAS-1)子實體形態(tài)。具體實施例方式以下通過實例對本發(fā)明作進一步說明實施例1菌種的選育和鑒定野生子實體采自中國新疆木壘荒漠中新疆阿魏莖基部，經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察、與同發(fā)生于新疆阿魏上的俗稱阿魏菇的近似種Pleurotuseryngiivar.ferula進行交配試驗、rDNA-ITS大小和序列檢測，鑒定為白靈菇，中文名稱白靈側(cè)耳，拉丁學(xué)名為Pleurotusnebrodensis(Inzengae)Quél.，將野生子實體組織分離物和多孢子雜交后的培養(yǎng)物進行栽培比較篩選，發(fā)明本專利。孢子分離為在20℃～22℃室溫弱光條件下彈射孢子，收集到白色粉末狀物后，一部分移至PDA平板上進行多孢雜交，獲得多孢雜交培養(yǎng)物，一部分用無菌水制成濃度適宜的孢子液，涂平板后，置于25℃培養(yǎng)，見到肉眼可見的小菌落時，挑取菌絲，置于顯微鏡下觀察，將無鎖狀聯(lián)合的菌落作為單孢產(chǎn)生的單核菌絲，確定4個交配型后，與同發(fā)生在新疆阿魏上的近似種Pleurotuseryngiivar.ferula的4個交配型的單核菌絲進行交配試驗。以有無鎖狀聯(lián)合作為交配與否的標(biāo)志物，結(jié)果未見鎖狀聯(lián)合，表明分離物與Pleurotuseryngiivar.ferula不可交配，為不同種。根據(jù)《中國大型真菌》，經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定為Pleurotusnebrodensis(Inzengae)Quél.。多孢子雜交培養(yǎng)物中，挑取菌絲萌發(fā)早，無污染的菌落進行純化培養(yǎng)，進行平板出菇，繼而進行子實體組織分離和培養(yǎng)，獲得遺傳學(xué)一致的雙核菌絲，再行培養(yǎng)和栽培，以現(xiàn)有商業(yè)品種作對照。同時對雙核菌絲進行DNA檢測，檢測結(jié)果為其rDNA-ITS大小和序列與GenbankNo.AY311408(Pleurotusnebrodensis)完全相同，進一步驗證了形態(tài)學(xué)觀察和交配試驗鑒定結(jié)果的正確性。栽培結(jié)果表明本專利品種較對照出菇整齊，菇潮集中，子實體發(fā)育快且一致，較對照菇潮縮短20天以上，子實體發(fā)育快3天以上，且無畸形菇，菇形較對照潔白優(yōu)美。實施例2菌種生產(chǎn)方法1、母種PDA培養(yǎng)基，24～28℃培養(yǎng)，10～12天長滿斜面或平板，貯藏溫度為4℃。2、原種和栽培種棉籽殼培養(yǎng)基，配方為棉籽殼95％或90％，玉米粉4％或麥麩9％，石膏1％，含水量為料水比1∶1.4，22～26℃培養(yǎng)，原種40～45天長滿容器，栽培種35天左右長滿容器，貯藏溫度為4℃。原種還可以使用谷粒作培養(yǎng)基，按常規(guī)方法制作，20天左右長滿容器。實施例3栽培方法1、栽培工藝培養(yǎng)基制作→冷卻接種→發(fā)菌→后熟→低溫刺激→出菇→采收。2、栽培培養(yǎng)基棉籽殼90％，玉米粉6％，石灰2％，石膏1％，磷酸二氫鉀1％，含水量為料水比1∶1.5～1.6。3、發(fā)菌條件室溫22～24℃，空氣相對濕度60～75％，暗光，通風(fēng)良好。4、后熟條件室溫18～20℃，空氣相對濕度60～75％，弱光，通風(fēng)良好。5、低溫刺激將菌袋置于環(huán)境溫度-5～5℃下7天。6、出菇條件農(nóng)業(yè)式栽培溫度5～18℃，工業(yè)式栽培12～15℃，空氣相對濕度75～85％，光照200～800Lux，通風(fēng)良好，環(huán)境CO2≤400×10-6。7、栽培周期在上述條件下，發(fā)菌期需要45～50天，后熟期需要30～40天，低溫刺激7～14天，出菇條件下原基形成期20天左右，子實體分化至采收7～8天，從接種至采收第一潮菇需要110～130天。農(nóng)業(yè)式栽培可一潮菇后覆土出二潮菇，潮菇間隔45～60天，出兩潮菇的整個生產(chǎn)周期155～180天。8、效果在上述條件下，出菇整齊，子實體外觀一致，潔白，菌柄側(cè)生，菌蓋扇貝形，7.5～12.5cm×7.5～11.5cm，多數(shù)11.25cm×10.26cm，菌肉平均厚4.5cm，平均單菇重185g左右，一潮菇產(chǎn)量在生物學(xué)效率≥35％，無畸形菇發(fā)生。實施例4品種的DNA標(biāo)記方法1、DNA提取PDA培養(yǎng)基，25℃平板培養(yǎng)，刮取菌絲，液氮低溫研磨，按常規(guī)方法提取。2、IGS2-PCR擴增體系dNTP(2.5mMeach)4μL，Primer1、Primer2各2.5μL，ExTaqTMDNApolymerase1.25U，1×PCRbuffer，Template25ng，用ddH2O補齊至50μL。3、引物InvSR1R和5SRNAR。4、限制性內(nèi)切酶BsuRI、Hin6I、RsaI。5、IGS2-RFLP反應(yīng)條件94℃變性1min；60℃復(fù)性1min；72℃延伸3min；共35個循環(huán)。然后在72℃，7min延伸。酶切體系中限制性內(nèi)切酶(10U/μL)1μL，PCR產(chǎn)物6μL，10×buffer1μL，用水補齊至10μL。置于37℃下酶切4小時。6、電泳和觀察1.2％瓊脂糖凝膠電泳，在紫外凝膠成像系統(tǒng)下檢測酶切反應(yīng)結(jié)果。7、數(shù)據(jù)處理采用QuantityOne分析軟件。8、結(jié)果白靈菇中農(nóng)1號(CAAS-1)的IGS2經(jīng)BsuRI酶切，生成7個片斷；經(jīng)Hin6I酶切，生成6個片斷；經(jīng)RsaI酶切，生成3個片斷。片斷大小見表1，電泳圖譜見圖1、圖2、圖3。表1菌株IGS2經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切后產(chǎn)生片斷大小單位bp<tablesid="table1"num="001"><tablewidth="384">BsuRIHin6IRsaI1.1519230419662.60714666303.50413293474.33610375.2864606.2483227.165</table></tables>權(quán)利要求1.白靈菇新品種中農(nóng)1號(CAAS-1)是通過采集新疆野生白靈菇子實體，進行多孢子雜交和純化、繼而進行形成子實體的組織分離和篩選，育成的白靈菇商業(yè)栽培品種，在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGMCC1300。2.根據(jù)權(quán)力要求1所述的白靈菇新品種中農(nóng)1號(CAAS-1)，其遺傳學(xué)特征在于其rDNA的IGS2經(jīng)BsuRI酶切，生成7個片斷；經(jīng)Hin6I酶切，生成6個片斷；經(jīng)RsaI酶切，生成3個片斷。。3.權(quán)利要求1所述白靈菇新品種中農(nóng)1號(CAAS-1)其子實體形態(tài)特征在于更潔白，菌柄側(cè)生，菌蓋扇貝形，7.5～12.5cm×7.5～11.5cm，多數(shù)11.25cm×10.26cm，菌肉平均厚4.5cm，平均單菇重185g左右，菌柄的長寬比約1∶1，菌蓋的長寬比約1∶1，菌蓋長和菌柄長之比約2.5∶1，典型子實體如圖4。子實體形成整齊度和形態(tài)一致性均大大高于其它商業(yè)栽培品種。4.權(quán)利要求1所述的白靈菇新品種，其菌絲生長最適溫度25～30℃，出菇期為100～120天，在適宜環(huán)境條件下子實體發(fā)育期7～10天。5.權(quán)利要求1所述的白靈菇新品種中農(nóng)1號(CAAS-1)的栽培方法，其特征在于包括如下步驟菌袋制備棉籽殼90％，玉米粉6％，石灰2％，石膏1％，磷酸二氫鉀1％，含水量為料水比1∶1.5～1.6。菌袋濕重1～1.5kg，經(jīng)高溫濕熱滅菌。菌絲培養(yǎng)黑暗，室溫22～24℃，培養(yǎng)期50～60天。出菇預(yù)處理18～20℃后熟30～40天，-5～5℃低溫刺激7～14天。出菇環(huán)境條件農(nóng)業(yè)式栽培溫度5～18℃，工業(yè)式栽培12～15℃，空氣相對濕度75～85％，光照200～800Lux，通風(fēng)良好，環(huán)境CO2≤400×10-6。一致性農(nóng)藝性狀的一致性良好，表現(xiàn)為子實體形成整齊，批量栽培的子實體20天左右完成一個菇潮，子實體形態(tài)的一致性高于80％，大大高于現(xiàn)有商業(yè)栽培品種。無畸形菇發(fā)生。優(yōu)質(zhì)商品形態(tài)菇占80％以上。全文摘要本發(fā)明是有關(guān)新的白靈菇品種及其菌種生產(chǎn)和栽培方法。本品種是通過多孢雜交獲得的新品種－中農(nóng)1號(CAAS－1)；并對本品種的特征特性進行詳細描述，對菌種生產(chǎn)和栽培方法有詳細說明。文檔編號A01G1/04GK1813513SQ20051005222公開日2006年8月9日申請日期2005年1月31日優(yōu)先權(quán)日2005年1月31日發(fā)明者張金霞,黃晨陽,李萍申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研究所,阜新華農(nóng)食用菌科技發(fā)展有限公司